人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Amnion Mesenchymal Cells, hAMCs)不僅具有向三個(gè)胚層方向分化的能力,而且易獲得,倫理爭議小,具抗炎性和免疫耐受性等優(yōu)點(diǎn),因此在科學(xué)研究及臨床應(yīng)用中極具潛力。 本文考察hAMCs在微載體動(dòng)態(tài)與二維靜態(tài)培養(yǎng)體系中的擴(kuò)增、代謝及對數(shù)生長期收獲的細(xì)胞集落形成能力、多向分化能力；并進(jìn)一步比較了hAMCs在微載體動(dòng)態(tài)和二維靜態(tài)成骨誘導(dǎo)體系中的增殖、代謝及成骨分化,初步探討了微載體培養(yǎng)體系中流體刺激與I型膠原包被對在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中生長的hAMCs的增殖與成骨分化的影響,以期建立集擴(kuò)增和分化誘導(dǎo)為一體的hAMCs體外培養(yǎng)系統(tǒng)。 研究結(jié)果表明,在微載體cytodex3懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中采用間歇攪拌、4%FBS、半量體積接種后,貼附率提高至(86.3±2.5)%,hAMCs培養(yǎng)12d后,獲得的最高細(xì)胞數(shù)是二維靜態(tài)培養(yǎng)的26倍。與二維靜態(tài)培養(yǎng)相比,微載體培養(yǎng)條件下hAMCs的葡萄糖利用率更高,收獲的細(xì)胞具有更高的集落形成率(P<0.05)、成骨和成脂肪的潛能(P<0.05)。在14d的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)中,微載體動(dòng)態(tài)誘導(dǎo)培養(yǎng)體系中獲得的最高細(xì)...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞概述
        1.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的表型
        1.1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞的分化潛能
        1.1.4 間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用價(jià)值
    1.2 胎膜來源的間充質(zhì)干細(xì)胞
    1.3 影響間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的因素
        1.3.1 培養(yǎng)基
        1.3.2 血清
        1.3.3 生長因子
        1.3.4 接種密度
        1.3.5 滲透壓及pH
        1.3.6 培養(yǎng)方式
    1.4 本文的研究目的及意義
第2章 微載體培養(yǎng)體系中人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增
    2.1 概述
    2.2 材料與方法
        2.2.1 hAMCs的分離和培養(yǎng)
        2.2.2 轉(zhuǎn)瓶硅化處理
        2.2.3 微載體預(yù)處理
        2.2.4 細(xì)胞接種
        2.2.5 轉(zhuǎn)瓶換液和取樣
        2.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.7 貼附曲線測定
        2.2.8 生長曲線測定
        2.2.9 乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性檢測
        2.2.10 葡萄糖和乳酸的測定
        2.2.11 滲透壓及pH測定
        2.2.12 掃描電鏡觀察
        2.2.13 培養(yǎng)細(xì)胞的收獲
        2.2.14 集落形成率測定
        2.2.15 表面標(biāo)志分析
        2.2.16 成骨誘導(dǎo)
        2.2.17 茜素紅染色
        2.2.18 hAMCs脂肪誘導(dǎo)
        2.2.19 油紅染色
        2.2.20 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 細(xì)胞接種
        2.3.2 細(xì)胞接種過程優(yōu)化及細(xì)胞生長
        2.3.3 細(xì)胞形態(tài)
        2.3.4 葡萄糖與乳酸代謝
        2.3.5 滲透壓與pH
        2.3.6 微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中收獲的細(xì)胞的功能鑒定
    2.4 本章小節(jié)
第3章 微載體誘導(dǎo)體系中人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化
    3.1 概述
    3.2 材料與方法
        3.2.1 hAMCs的分離和培養(yǎng)
        3.2.2 轉(zhuǎn)瓶硅化處理
        3.2.3 微載體預(yù)處理
        3.2.4 細(xì)胞接種
        3.2.5 成骨誘導(dǎo)
        3.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.2.7 葡萄糖和乳酸的測定
        3.2.8 滲透壓及pH測定
        3.2.9 堿性磷酸酯酶(ALP)活性的測定
        3.2.10 胞外鈣基質(zhì)含量測定
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 hAMCs的形態(tài)
        3.3.2 hAMCs的增殖
        3.3.3 葡萄糖與乳酸代謝
        3.3.4 滲透壓及pH測定
        3.3.5 成骨分化
    3.4 本章小結(jié)
第4章 流體刺激與Ⅰ型膠原對人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響
    4.1 概述
    4.2 材料與方法
        4.2.1 hAMCs的分離及培養(yǎng)
        4.2.2 轉(zhuǎn)瓶硅化處理
        4.2.3 微載體預(yù)處理
        4.2.4 膠原包被
        4.2.5 流體刺激
        4.2.6 細(xì)胞接種及培養(yǎng)
        4.2.7 成骨誘導(dǎo)
        4.2.8 葡萄糖和乳酸的測定
        4.2.9 堿性磷酸酯酶(ALP)活性的測定
        4.2.10 胞外鈣基質(zhì)含量測定
        4.2.11 茜素紅染色
        4.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 微載體誘導(dǎo)體系中動(dòng)態(tài)培養(yǎng)和靜態(tài)培養(yǎng)對hAMCs成骨分化的影響
        4.3.2 流體刺激與Ⅰ型膠原對hAMCs成骨分化的影響
        4.3.3 流體刺激與膠原包被對hAMCs成骨分化的作用
    4.4 本章小節(jié)
第5章 全文總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3829581