目的構(gòu)建含有類固醇激素受體(VDR)起始密碼子區(qū)突變序列的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)。方法以人肝組織總RNA為模板應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增出VDR cDNA基因序列全長并克隆于T載體后酶切再與空載體pcDNA3.1(-)B-myc/his連接形成重組載體;測序驗(yàn)證后與熒光素酶報(bào)告基因連接構(gòu)建起始密碼子區(qū)T/C突變型人VDR,以phRL-SV40質(zhì)粒作為內(nèi)對照共轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,設(shè)1,25(OH)2VD3不同濃度點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)后,化學(xué)發(fā)光法檢測熒光強(qiáng)度。結(jié)果人VDR基因起始密碼子區(qū)突變重組質(zhì)粒測序驗(yàn)證與Genbank完全相同。通過雙熒光素酶報(bào)告基因分析系統(tǒng)檢測,1,25(OH)2VD3干預(yù)組熒光素酶活性數(shù)值顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明人VDR起始密碼子區(qū)突變重組體在COS-7細(xì)胞中存在轉(zhuǎn)錄激活能力。結(jié)論成功構(gòu)建了含有起始密碼子區(qū)突變的報(bào)告基因載體,為VDR有關(guān)的藥物代謝異常、腫瘤易感性提供機(jī)制性指導(dǎo)。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人VDR基因克隆
        1.2.2 野生型和起始密碼子區(qū)突變VDR真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 轉(zhuǎn)染處理
        1.2.4 雙熒光素酶活性分析
    1.3 統(tǒng)計(jì)處理
2 結(jié) 果
    2.1 真核表達(dá)載體人核受體野生型VDR的構(gòu)建
    2.2 真核表達(dá)載體人核受體VDR突變型的構(gòu)建
    2.3 熒光素酶報(bào)告基因載體的構(gòu)建
3 討 論



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