本文關鍵詞：脂肪間充質干細胞成軟骨組織誘導的新方法，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 脂肪間充質干細胞是一種在脂肪組織中分離出來的多能干細胞,在特定的誘導條件下,可以向脂肪、骨、軟骨等細胞類型分化。由于脂肪間充質干細胞成軟骨分化能力的證實,其作為軟骨工程種子細胞的研究越來越多。實驗證實,脂肪間充質干細胞在三維培養(yǎng)環(huán)境中高密度培養(yǎng)可以成軟骨誘導,但在單層培養(yǎng)誘導時無軟骨細胞生成,其中三維培養(yǎng)方法有微滴法,微團法。有文獻報道,成體軟骨細胞單層高密度培養(yǎng)可以形成軟骨細胞膜片樣結構,在此基礎上,設想利用脂肪間充質干細胞成軟骨細胞誘導后的細胞,再做單層高密度培養(yǎng),觀察形成軟骨膜片的可行性,并進一步觀察形成質韌軟骨組織的可行性。探索脂肪間充質干細胞成軟骨誘導的新方法。 實驗目的： 將大鼠脂肪間充質干細胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)在藻酸鹽凝膠中高密度培養(yǎng)成軟骨細胞誘導后,將細胞自凝膠中釋放單層高密度培養(yǎng),探索脂肪間充質干細胞成軟骨細胞誘導后的細胞形成軟骨組織的可行性。 實驗方法： 取健康SD大鼠雙側腹股溝脂肪組織,用0.1%Ⅰ型膠原酶將脂肪組織消化為單細胞懸液后離心,得到脂肪間充質干細胞原代培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)。細胞增殖達到融合時,用0.25%胰蛋白酶消化傳代后用流式細胞技術檢測間充質干細胞表面標志CD90、CD44的表達進行細胞鑒定。 將第6代脂肪間充質干細胞以5×106/ml密度重懸于藻酸鈣凝膠中,形成脂肪間充質干細胞-藻酸鹽微珠,用含有軟骨誘導細胞因子TGF-β1(transforming growth factor-β1)、胰島素轉鐵蛋白硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)、維生素C的成軟骨誘導培養(yǎng)基成軟骨細胞誘導培養(yǎng)2周。2周后將凝膠吹散釋放出成軟骨誘導后的細胞,將得到的細胞進行免疫組化實驗,檢測大鼠軟骨特異性Ⅱ型膠原蛋白的表達,以鑒定軟骨組織的生成。 將成軟骨誘導后的細胞單層高密度培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中,繼續(xù)以軟骨誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)2周,觀察細胞的生長特點及是否有新生組織形成。探索脂肪間充質干細胞在藻酸鈣中成軟骨誘導后,單層高密度培養(yǎng)形成軟骨組織的可行性。 實驗結果： 大鼠脂肪間充質干細胞原代及傳代后呈梭形生長,傳代后的細胞呈規(guī)則排列漩渦狀生長。第6代次細胞形態(tài)仍無明顯改變,細胞傳代后細胞特性保持較為穩(wěn)定。大鼠脂肪間充質干細胞的表面標志CD90、CD44陽性,說明其為間充質干細胞來源。脂肪間充質干細胞-藻酸鹽微珠成軟骨誘導2周后,釋放出的細胞行細胞免疫組織化學檢測軟骨特異性Ⅱ型膠原蛋白的表達,結果呈陽性。經過成軟骨誘導后的細胞高密度單層培養(yǎng),在軟骨誘導培養(yǎng)基作用下細胞逐漸聚集形成具有三維形態(tài)的軟骨組織。 結論： 在藻酸鹽凝膠中高密度培養(yǎng)大鼠脂肪間充質干細胞成軟骨誘導,再利用凝膠釋放的細胞培養(yǎng)形成軟骨組織可以作為軟骨組織構建的新方法。
【關鍵詞】：脂肪間充質干細胞 藻酸鹽 TGF-β1 軟骨組織
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 特殊符號10-11
• 前言11-19
• 課題設計思路19-20
• 第一部分 大鼠脂肪間充質干細胞的培養(yǎng)與鑒定20-28
• 材料與方法20-22
• 實驗方法22-23
• 實驗結果23-25
• 實驗討論25-28
• 第二部分 大鼠脂肪間充質干細胞成軟骨組織誘導及鑒定28-35
• 材料與方法28-29
• 實驗步驟29-31
• 實驗結果31-32
• 實驗討論32-35
• 第三部分 脂肪間充質干細胞成軟骨細胞誘導后細胞再培養(yǎng)35-39
• 材料與方法35-36
• 實驗步驟36
• 實驗結果36-37
• 討論37-39
• 參考文獻39-44
• 致謝44-45
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文45-46
• 學位論文評閱及答辯情況表46

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