本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨組織誘導(dǎo)的新方法，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞是一種在脂肪組織中分離出來的多能干細(xì)胞,在特定的誘導(dǎo)條件下,可以向脂肪、骨、軟骨等細(xì)胞類型分化。由于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化能力的證實(shí),其作為軟骨工程種子細(xì)胞的研究越來越多。實(shí)驗(yàn)證實(shí),脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在三維培養(yǎng)環(huán)境中高密度培養(yǎng)可以成軟骨誘導(dǎo),但在單層培養(yǎng)誘導(dǎo)時(shí)無軟骨細(xì)胞生成,其中三維培養(yǎng)方法有微滴法,微團(tuán)法。有文獻(xiàn)報(bào)道,成體軟骨細(xì)胞單層高密度培養(yǎng)可以形成軟骨細(xì)胞膜片樣結(jié)構(gòu),在此基礎(chǔ)上,設(shè)想利用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)后的細(xì)胞,再做單層高密度培養(yǎng),觀察形成軟骨膜片的可行性,并進(jìn)一步觀察形成質(zhì)韌軟骨組織的可行性。探索脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)的新方法。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?將大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)在藻酸鹽凝膠中高密度培養(yǎng)成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)后,將細(xì)胞自凝膠中釋放單層高密度培養(yǎng),探索脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)后的細(xì)胞形成軟骨組織的可行性。 實(shí)驗(yàn)方法： 取健康SD大鼠雙側(cè)腹股溝脂肪組織,用0.1%Ⅰ型膠原酶將脂肪組織消化為單細(xì)胞懸液后離心,得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞增殖達(dá)到融合時(shí),用0.25%胰蛋白酶消化傳代后用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD90、CD44的表達(dá)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。 將第6代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以5×106/ml密度重懸于藻酸鈣凝膠中,形成脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞-藻酸鹽微珠,用含有軟骨誘導(dǎo)細(xì)胞因子TGF-β1(transforming growth factor-β1)、胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)、維生素C的成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)2周。2周后將凝膠吹散釋放出成軟骨誘導(dǎo)后的細(xì)胞,將得到的細(xì)胞進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn),檢測(cè)大鼠軟骨特異性Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá),以鑒定軟骨組織的生成。 將成軟骨誘導(dǎo)后的細(xì)胞單層高密度培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中,繼續(xù)以軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)2周,觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)及是否有新生組織形成。探索脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在藻酸鈣中成軟骨誘導(dǎo)后,單層高密度培養(yǎng)形成軟骨組織的可行性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代后呈梭形生長(zhǎng),傳代后的細(xì)胞呈規(guī)則排列漩渦狀生長(zhǎng)。第6代次細(xì)胞形態(tài)仍無明顯改變,細(xì)胞傳代后細(xì)胞特性保持較為穩(wěn)定。大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志CD90、CD44陽(yáng)性,說明其為間充質(zhì)干細(xì)胞來源。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞-藻酸鹽微珠成軟骨誘導(dǎo)2周后,釋放出的細(xì)胞行細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)軟骨特異性Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá),結(jié)果呈陽(yáng)性。經(jīng)過成軟骨誘導(dǎo)后的細(xì)胞高密度單層培養(yǎng),在軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下細(xì)胞逐漸聚集形成具有三維形態(tài)的軟骨組織。 結(jié)論： 在藻酸鹽凝膠中高密度培養(yǎng)大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo),再利用凝膠釋放的細(xì)胞培養(yǎng)形成軟骨組織可以作為軟骨組織構(gòu)建的新方法。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 藻酸鹽 TGF-β1 軟骨組織
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 特殊符號(hào)10-11
• 前言11-19
• 課題設(shè)計(jì)思路19-20
• 第一部分 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定20-28
• 材料與方法20-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-25
• 實(shí)驗(yàn)討論25-28
• 第二部分 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨組織誘導(dǎo)及鑒定28-35
• 材料與方法28-29
• 實(shí)驗(yàn)步驟29-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-32
• 實(shí)驗(yàn)討論32-35
• 第三部分 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)后細(xì)胞再培養(yǎng)35-39
• 材料與方法35-36
• 實(shí)驗(yàn)步驟36
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-37
• 討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 致謝44-45
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文45-46
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表46

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本文編號(hào)：382710