發(fā)布時(shí)間：2017-05-19 10:08

  本文關(guān)鍵詞：hHCN4基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 將hHCN4基因修飾的大鼠BMSCs細(xì)胞與乳鼠心肌細(xì)胞（Cardiac Myocyte,CM）進(jìn)行共培養(yǎng)，對(duì)其細(xì)胞連接功能及起搏功能進(jìn)行研究，檢測(cè)hHCN4基因修飾的大鼠BMSCs細(xì)胞能否與心肌細(xì)胞建立有效地電機(jī)械連接，旨在為進(jìn)一步進(jìn)行“生物起搏”治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1.乳鼠心室肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)：原代乳鼠心肌細(xì)胞采用消化法進(jìn)行分離純化，采用貼壁法培養(yǎng)，于共培養(yǎng)前一天將心肌細(xì)胞用50ug/mlDAPI標(biāo)記過(guò)夜。 2.將已標(biāo)記的心肌細(xì)胞分別與BMSCs、 hHCN4+BMSCs及hHCN4－BMSCs共培養(yǎng)。 3.共培養(yǎng)后計(jì)數(shù)各組細(xì)胞的自發(fā)搏動(dòng)頻率； 4.熒光顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)的兩類細(xì)胞； 5.Westernblot檢測(cè)縫隙連接蛋白（Connexin Cx）43的表達(dá)； 6.透射電鏡觀察細(xì)胞間縫隙連接形成情況； 結(jié)果 1.心肌細(xì)胞成功分離純化：倒置顯微鏡可見(jiàn)經(jīng)原代培養(yǎng)貼壁的心肌細(xì)胞間相互交織成網(wǎng)，，形成細(xì)胞簇，呈同步性自發(fā)搏動(dòng)，DAPI標(biāo)記的CM顯示藍(lán)色熒光。 2.共培養(yǎng)后，心室肌的自發(fā)搏動(dòng)頻率明顯增高�？瞻讓�(duì)照組細(xì)胞搏動(dòng)頻率為90±7次/min，與HCN4－對(duì)照組（88±8次/min）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組搏動(dòng)頻率（129±12次/min）明顯高于各對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)存在解剖位置上相鄰的BMSCs和CM。 4. Western blotting結(jié)果顯示，hHCN4+BMSC與CM共培養(yǎng)組CX43表達(dá)明顯高于hHCN4－BMSCs與CM共培養(yǎng)組。 5．透射電鏡顯示，hHCN4+BMSCs可與相鄰細(xì)胞間形成指狀交錯(cuò)的連接。 結(jié)論 1.心肌細(xì)胞與hHCN4基因修飾BMSCs能夠進(jìn)行共培養(yǎng)，并能夠產(chǎn)生自發(fā)搏動(dòng)。 2. hHCN4基因修飾的大鼠BMSCs可與CM建立有效的電機(jī)械連接，且可使心肌細(xì)胞的自發(fā)搏動(dòng)頻率明顯增快。
【關(guān)鍵詞】：人超級(jí)化激活環(huán)化核苷酸門控通道4基因 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌細(xì)胞 共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法10-18
• 結(jié)果18-20
• 討論20-23
• 結(jié)論23-24
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 文獻(xiàn)綜述28-41
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 在學(xué)期間科研成績(jī)41-42
• 致謝42-43
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：hHCN4基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：378387