外周神經(jīng)損傷后大鼠背根節(jié)中許多基因的表達(dá)發(fā)生了明顯改變，以往主要采用原位雜交和免疫組織化學(xué)方法研究從正常組織中克隆的基因的表達(dá)改變，雖然發(fā)現(xiàn)了一些表達(dá)增加的物質(zhì)，如甘丙肽、神經(jīng)肽Y和神經(jīng)肽Y的受體等神經(jīng)肽和受體，以及一氧化氮合酶等，但是已有的研究結(jié)果還不能充分解釋外周神經(jīng)損傷后病理現(xiàn)象的分子和細(xì)胞機(jī)制，特別是慢性痛機(jī)制。本研究應(yīng)用多種差異表達(dá)基因克隆技術(shù)，克隆在外周神經(jīng)損傷后背根節(jié)中差異表達(dá)的基因。 首先，針對電生理實(shí)驗(yàn)提示的外周神經(jīng)損傷后背根節(jié)中可能存在至少一種高表達(dá)的神經(jīng)降壓肽受體，最近神經(jīng)降壓肽受體2型被克隆，我們用原位雜交技術(shù)研究了神經(jīng)降壓肽受體2型在背根節(jié)中的分布和外周神經(jīng)損傷后對它表達(dá)的影響。發(fā)現(xiàn)神經(jīng)降壓肽受體2型主要在大細(xì)胞中表達(dá)，有11％的神經(jīng)元含神經(jīng)降壓肽受體2型mRNA，損傷后含這種神經(jīng)降壓肽受體mRNA的背根節(jié)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少。神經(jīng)降壓肽受體2型同背根節(jié)小神經(jīng)元中的神經(jīng)降壓肽受體1型一樣仍然是表達(dá)降低的受體。該結(jié)果再次提示用組織化學(xué)研究方法已難以深入了解外周神經(jīng)損傷后背根節(jié)中高表達(dá)的信息分子。 第二，我們探討了聯(lián)合應(yīng)用差異表達(dá)基因克隆技術(shù)來進(jìn)行研...

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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博士論文摘要
ABSTRACT
論文正文
一、前言
二、文獻(xiàn)回顧
    (一) 外周神經(jīng)損傷后背根節(jié)中基因表達(dá)變化及意義
    (二) 克隆差異表達(dá)基因的主要技術(shù)
三、材料與方法
    (一) 動物模型和取材
    (二) 實(shí)驗(yàn)方法
        1.原位雜交
        2.RNA的提取和mRNA的純化
        3.RNA變性甲醛凝膠電泳
        4.差異顯示PCR
        5.正常組和損傷組背根節(jié)經(jīng)典cDNA文庫的構(gòu)建
        6.脊髓差減文庫的構(gòu)建
        7.差異篩庫
        8.DNA序列測定
        9.序列的同源性比較
四、結(jié)果
    (一) 神經(jīng)降壓肽受體2型在背根節(jié)中的分布及外周神經(jīng)損傷對其表達(dá)的影響
    (二) 總RNA和mRNA的提取和純化
    (二) mRNA差異顯示方法的建立和外周神經(jīng)損傷后差異表達(dá)基因片段的克隆
    (四) 正常組和損傷組背根節(jié)經(jīng)典cDNA文庫的構(gòu)建
    (五) 用差異篩庫方法克隆差異表達(dá)基因
    (六) 脊髓差減文庫的構(gòu)建和篩選
五、討論
    (一) 常用的研究外周神經(jīng)損傷后基因表達(dá)的方法
    (二) 克隆差異表達(dá)基因方法的特點(diǎn)
    (三) cDNA文庫的初步分析及代表性
    (四) 部分差異基因的克隆、表達(dá)和意義
六、結(jié)論
七、致謝
八、參考文獻(xiàn)
九、博士在讀期間已發(fā)表和待發(fā)表的論文



本文編號：3778609