國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)HBV／C區(qū)變異與病變重度相關(guān)，但兩者之間的因果關(guān)系尚未確定。本研究以重組腺病毒為載體，將含有變異位點的HBV基因組轉(zhuǎn)入HepG2細胞和BALB／C小鼠，從體內(nèi)和體外研究變異位點的生物學(xué)意義，旨在闡明C區(qū)變異對宿主細胞免疫和體液免疫的影響。 1．重組腺病毒的構(gòu)建 用定點誘變技術(shù)，以含有1.2拷貝HBV基因組的p3.8Ⅱ質(zhì)粒為模板，構(gòu)建含L60V和I97L的突變株。采用AdEasy系統(tǒng)構(gòu)建重組腺病毒，以分子克隆手段將HBV基因組克隆入腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrack上，重組穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183細胞，通過同源重組獲得重組腺病毒質(zhì)粒，用Pac Ⅰ線性化后，轉(zhuǎn)染293包裝細胞，獲得含野生型和變異型HBV基因的3種重組腺病毒。 2．重組腺病毒生物學(xué)特征的鑒定 電鏡下觀察到了重組腺病毒具有典型的腺病毒形態(tài)，直徑約70nm。用PCR和Southern blot證實HBV DNA已整合入腺病毒基因組，有遺傳穩(wěn)定性：用RT-PCR檢出HBV特異的mRNA，用ELISA在感染了重組腺病毒的293細胞的培養(yǎng)上清中檢出了HBeAg。 ...

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重組腺病毒的構(gòu)建
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 重組腺病毒的生物學(xué)特性
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 重組腺病毒誘發(fā)小鼠免疫應(yīng)答
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
全文總結(jié)
博士學(xué)習(xí)期間發(fā)表論文
參考文獻
致謝



本文編號：3773150