本文關鍵詞：支架蛋白RACK1對炎性細胞因子表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：RACK1(Receptor for Activated C Kinase1),激活的蛋白激酶C受體1,最早發(fā)現(xiàn)RACK1的功能是和PKC結(jié)合、增強其活性,因此得名。RACK1是一種支架蛋白,由7個高度保守的Trp-Asp(WD)40結(jié)構(gòu)域組成,分子量為36kDa。RACK1在體內(nèi)廣泛表達,主要參與調(diào)控胚胎發(fā)育、細胞生長、細胞分化、細胞遷移、細胞凋亡、晝夜節(jié)律等多種生命活動過程。有文獻報道,RACK1參與調(diào)節(jié)了多條炎性信號通路,如JNK、GSK3β,然而關于RACK1對炎性細胞因子表達的影響尚不清楚。 目的：本研究選取人單核細胞THP1和原代巨噬細胞為主要研究模型,探討敲低RACK1對炎性細胞因子表達的影響,及其可能的分子機制。 方法：用慢病毒感染等方法敲低RACK1,通過Elisa,免疫印跡、RT-PCR,流式細胞術(shù)等方法檢測細胞因子表達,炎性通路信號蛋白表達變化等指標。 結(jié)果：在人單核細胞THP1中,敲低RACK1導致LPS刺激下的炎性細胞因子IL-6和TNF-α表達下降,同時伴隨著細胞增殖速度的減慢,但對細胞吞噬能力和CD14表達水平無顯著影響；在人原代巨噬細胞中敲低RACK1也導致LPS刺激下的炎性細胞因子IL-6和TNF-α表達下降。免疫印跡實驗結(jié)果表明RACK1缺失后不僅導致了MAPK炎性信號通路中JNK、p38的磷酸化水平下降,也導致NF-κB上游激酶IKK的磷酸化水平下降,并且RACK1的缺失伴有IKK、 JNK、p38分子共同上游蛋白IRAK1、TAK1和TRAF6蛋白的表達水平降低。RACK1不影響IRAK1、TAK1和TRAF6的mRNA水平和半衰期,但可以與PKCβⅡ結(jié)合促進IRAK1的優(yōu)先翻譯,而對TRAF6和TAK1的影響尚不清楚。 結(jié)論：RACK1通過維持IRAK1、TAK1和TRAF6的蛋白水平,實現(xiàn)對下游NF-κB, JNK, p38的調(diào)節(jié),從而影響了炎性細胞因子IL-6和TNF-α的表達,增強PKCβⅡ的活性可能是RACK1促進炎性細胞因子表達的部分機制。圖14幅,表0個,參考文獻27篇
【關鍵詞】：RACK1 IL-6 TNF-α IRAK1 TAK1 TRAF6
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略詞表11-14
• 1 前言14-16
• 2 RACK1 knock down對單核/巨噬細胞表達炎性細胞因子的影響16-24
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 試劑16
• 2.1.2 儀器16-17
• 2.2 方法17-19
• 2.2.1 試劑配置17
• 2.2.2 細胞模型選擇及凍存復蘇17-18
• 2.2.3 細胞處理18
• 2.2.4 Elisa檢測炎性細胞因子表達18-19
• 2.2.5 免疫印跡分析19
• 2.2.6 統(tǒng)計學分析19
• 2.3 結(jié)果19-22
• 2.3.1 RACK1瞬時knock down導致LPS誘導的IL-6表達顯著降低19-20
• 2.3.2 THP1細胞中RACK1穩(wěn)定knock down導致LPS誘導的TNF-α/IL-6表達顯著降低20-21
• 2.3.3 人原代巨噬細胞中RACK1瞬時knock down導致LPS誘導的TNF-α/IL-6表達顯著降低21-22
• 2.4 討論22-23
• 2.5 小結(jié)23-24
• 3 RACK1 knock down對THP1細胞分化狀態(tài)的影響24-30
• 3.1 材料24
• 3.1.1 試劑24
• 3.1.2 儀器24
• 3.2 方法24-25
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)24
• 3.2.2 生長曲線檢測24-25
• 3.2.3 CD14表達檢測25
• 3.2.4 吞噬實驗25
• 3.2.5 吉姆薩染色25
• 3.2.6 統(tǒng)計學分析25
• 3.3 結(jié)果25-28
• 3.3.1 THP1細胞中RACK1瞬時knock down導致細胞生長的速度減慢25-26
• 3.3.2 THP1細胞中RACK1穩(wěn)定knock down導致細胞生長的速度減慢26
• 3.3.3 RACK1 knock down不引起THP1細胞向巨噬細胞方向分化26-28
• 3.4 討論28-29
• 3.5 小結(jié)29-30
• 4 RACK1缺失對炎性細胞因子表達影響機制的探討30-40
• 4.1 材料30
• 4.1.1 材料30
• 4.1.2 儀器30
• 4.2 方法30-32
• 4.2.1 總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄為cDNA30-31
• 4.2.2 GSK3β inhibitor處理31
• 4.2.3 RT-PCR分析31
• 4.2.4 PKCβⅡ inhibitor處理31-32
• 4.3 結(jié)果32-38
• 4.3.1 特異抑制GSK3β導致LPS誘導的IL-6表達減低32
• 4.3.2 特異抑制GSK3β不影響LPS誘導的IKK活化32-33
• 4.3.3 RACK1穩(wěn)定knock down對IKK活化上游分子事件的影響33-34
• 4.3.4 RACK1瞬時knock down對IKK活化上游分子事件的影響34-35
• 4.3.5 RACK1表達水平降低對IRAK1/TRAF6/TAK1 mRNA水平的影響35-36
• 4.3.6 RACK1表達水平降低對IRAK1/TRAF6/TAK1蛋白穩(wěn)定性的影響36-37
• 4.3.7 RACK1可能通過增強PKCβⅡ活性影響IRAK1的蛋白量37-38
• 4.4 討論38-39
• 4.5 小結(jié)39-40
• 5 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻47-51
• 攻讀學位期間主要的研究成果目錄51-52
• 致謝52-53

【共引文獻】

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本文編號：375985