本文關(guān)鍵詞：支架蛋白RACK1對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：RACK1(Receptor for Activated C Kinase1),激活的蛋白激酶C受體1,最早發(fā)現(xiàn)RACK1的功能是和PKC結(jié)合、增強其活性,因此得名。RACK1是一種支架蛋白,由7個高度保守的Trp-Asp(WD)40結(jié)構(gòu)域組成,分子量為36kDa。RACK1在體內(nèi)廣泛表達(dá),主要參與調(diào)控胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、細(xì)胞分化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞凋亡、晝夜節(jié)律等多種生命活動過程。有文獻(xiàn)報道,RACK1參與調(diào)節(jié)了多條炎性信號通路,如JNK、GSK3β,然而關(guān)于RACK1對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響尚不清楚。 目的：本研究選取人單核細(xì)胞THP1和原代巨噬細(xì)胞為主要研究模型,探討敲低RACK1對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響,及其可能的分子機制。 方法：用慢病毒感染等方法敲低RACK1,通過Elisa,免疫印跡、RT-PCR,流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測細(xì)胞因子表達(dá),炎性通路信號蛋白表達(dá)變化等指標(biāo)。 結(jié)果：在人單核細(xì)胞THP1中,敲低RACK1導(dǎo)致LPS刺激下的炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α表達(dá)下降,同時伴隨著細(xì)胞增殖速度的減慢,但對細(xì)胞吞噬能力和CD14表達(dá)水平無顯著影響；在人原代巨噬細(xì)胞中敲低RACK1也導(dǎo)致LPS刺激下的炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α表達(dá)下降。免疫印跡實驗結(jié)果表明RACK1缺失后不僅導(dǎo)致了MAPK炎性信號通路中JNK、p38的磷酸化水平下降,也導(dǎo)致NF-κB上游激酶IKK的磷酸化水平下降,并且RACK1的缺失伴有IKK、 JNK、p38分子共同上游蛋白IRAK1、TAK1和TRAF6蛋白的表達(dá)水平降低。RACK1不影響IRAK1、TAK1和TRAF6的mRNA水平和半衰期,但可以與PKCβⅡ結(jié)合促進(jìn)IRAK1的優(yōu)先翻譯,而對TRAF6和TAK1的影響尚不清楚。 結(jié)論：RACK1通過維持IRAK1、TAK1和TRAF6的蛋白水平,實現(xiàn)對下游NF-κB, JNK, p38的調(diào)節(jié),從而影響了炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的表達(dá),增強PKCβⅡ的活性可能是RACK1促進(jìn)炎性細(xì)胞因子表達(dá)的部分機制。圖14幅,表0個,參考文獻(xiàn)27篇
【關(guān)鍵詞】：RACK1 IL-6 TNF-α IRAK1 TAK1 TRAF6
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略詞表11-14
• 1 前言14-16
• 2 RACK1 knock down對單核/巨噬細(xì)胞表達(dá)炎性細(xì)胞因子的影響16-24
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 試劑16
• 2.1.2 儀器16-17
• 2.2 方法17-19
• 2.2.1 試劑配置17
• 2.2.2 細(xì)胞模型選擇及凍存復(fù)蘇17-18
• 2.2.3 細(xì)胞處理18
• 2.2.4 Elisa檢測炎性細(xì)胞因子表達(dá)18-19
• 2.2.5 免疫印跡分析19
• 2.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析19
• 2.3 結(jié)果19-22
• 2.3.1 RACK1瞬時knock down導(dǎo)致LPS誘導(dǎo)的IL-6表達(dá)顯著降低19-20
• 2.3.2 THP1細(xì)胞中RACK1穩(wěn)定knock down導(dǎo)致LPS誘導(dǎo)的TNF-α/IL-6表達(dá)顯著降低20-21
• 2.3.3 人原代巨噬細(xì)胞中RACK1瞬時knock down導(dǎo)致LPS誘導(dǎo)的TNF-α/IL-6表達(dá)顯著降低21-22
• 2.4 討論22-23
• 2.5 小結(jié)23-24
• 3 RACK1 knock down對THP1細(xì)胞分化狀態(tài)的影響24-30
• 3.1 材料24
• 3.1.1 試劑24
• 3.1.2 儀器24
• 3.2 方法24-25
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)24
• 3.2.2 生長曲線檢測24-25
• 3.2.3 CD14表達(dá)檢測25
• 3.2.4 吞噬實驗25
• 3.2.5 吉姆薩染色25
• 3.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析25
• 3.3 結(jié)果25-28
• 3.3.1 THP1細(xì)胞中RACK1瞬時knock down導(dǎo)致細(xì)胞生長的速度減慢25-26
• 3.3.2 THP1細(xì)胞中RACK1穩(wěn)定knock down導(dǎo)致細(xì)胞生長的速度減慢26
• 3.3.3 RACK1 knock down不引起THP1細(xì)胞向巨噬細(xì)胞方向分化26-28
• 3.4 討論28-29
• 3.5 小結(jié)29-30
• 4 RACK1缺失對炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響機制的探討30-40
• 4.1 材料30
• 4.1.1 材料30
• 4.1.2 儀器30
• 4.2 方法30-32
• 4.2.1 總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄為cDNA30-31
• 4.2.2 GSK3β inhibitor處理31
• 4.2.3 RT-PCR分析31
• 4.2.4 PKCβⅡ inhibitor處理31-32
• 4.3 結(jié)果32-38
• 4.3.1 特異抑制GSK3β導(dǎo)致LPS誘導(dǎo)的IL-6表達(dá)減低32
• 4.3.2 特異抑制GSK3β不影響LPS誘導(dǎo)的IKK活化32-33
• 4.3.3 RACK1穩(wěn)定knock down對IKK活化上游分子事件的影響33-34
• 4.3.4 RACK1瞬時knock down對IKK活化上游分子事件的影響34-35
• 4.3.5 RACK1表達(dá)水平降低對IRAK1/TRAF6/TAK1 mRNA水平的影響35-36
• 4.3.6 RACK1表達(dá)水平降低對IRAK1/TRAF6/TAK1蛋白穩(wěn)定性的影響36-37
• 4.3.7 RACK1可能通過增強PKCβⅡ活性影響IRAK1的蛋白量37-38
• 4.4 討論38-39
• 4.5 小結(jié)39-40
• 5 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果目錄51-52
• 致謝52-53

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 白冰珂;陶玲;沈宏輝;侯俊;胡燕;羅聲棟;楊銳創(chuàng);貌盼勇;;新型呼腸病毒M片段對核轉(zhuǎn)錄因子κB的活性抑制的研究[J];傳染病信息;2013年06期

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4 李芹;常國斌;陳國宏;徐琪;竇套存;欒德琴;陳蓉;盛中偉;張穎;;如皋雞NLRC5基因外顯子8多態(tài)性及其與部分免疫指標(biāo)的關(guān)聯(lián)分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2013年09期

5 曾滔;趙福平;王光凱;吳明明;魏彩虹;張莉;李利;張紅平;杜立新;;基于群體分化指數(shù)F_(ST)的綿羊全基因組選擇信號檢測[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2013年12期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 謝輝蓉;促減數(shù)分裂甾醇對小鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

2 胡麗娟;hPER1相互作用蛋白的篩選及與近日節(jié)律關(guān)系的研究[D];四川大學(xué);2006年

3 高盈;RACK1對肺腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移e笥跋旒傲俅慘庖錥D];中南大學(xué);2012年

4 王蓓;EV71拮抗I型干擾素產(chǎn)生的分子機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 李寶燕;煙草WD40蛋白TTG2對生長發(fā)育和抗病性的調(diào)控作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 張莉;綿羊肉用性狀全基因組關(guān)聯(lián)分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

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8 杜鉞;小鼠肝癌細(xì)胞中Annexin A7相互作用蛋白的鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 侯元春;棉鈴蟲活化蛋白激酶C受體1（RACK1）基因的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 閆誠;擬南芥WD-40重復(fù)蛋白AtARCA和AtAGB1對干旱脅迫信號響應(yīng)機理的研究[D];揚州大學(xué);2005年

5 魯芳;PER1相互作用蛋白RACK1的近日節(jié)律相關(guān)基因[D];四川大學(xué);2006年

6 楊艷麗;OsRACK1過表達(dá)和抑制表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[D];揚州大學(xué);2007年

7 張婧;RACK1蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)及其在調(diào)控擬南芥氣孔運動中的作用[D];揚州大學(xué);2008年

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9 曹丹丹;OsRACK1在水稻種子萌發(fā)期響應(yīng)干旱和鹽脅迫的功能分析及其融合蛋白的表達(dá)和純化[D];揚州大學(xué);2010年

10 雷玉平;冠狀動脈粥樣硬化患者外周血RACK1表達(dá)變化及與冠脈狹窄程度的關(guān)系[D];青島大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：支架蛋白RACK1對炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：375985