發(fā)布時(shí)間：2017-05-17 18:02

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲排泄分泌抗原（ESA）通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討剛地弓形蟲對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs)凋亡水平的影響及其分子機(jī)制。 方法(1)NSCs的分離、傳代及鑒定。將6-8周齡的ICR小鼠按照雌：雄=2:1的比例合籠，在孕13-15d,剖宮取小鼠胎盤，分離兩側(cè)大腦半球，制備單細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)，傳代過(guò)程中使用Nestin抗體對(duì)其進(jìn)行免疫熒光染色鑒定。（2）小鼠全基因組表達(dá)譜芯片篩查弓形蟲感染組NSCs差異表達(dá)基因。建立弓形蟲與NSCstranswell共培養(yǎng)體系，上室加入1×10~6個(gè)RH速殖子，下室為NSCs，感染48h后，收集感染組和對(duì)照組的下室NSCs，分別提取細(xì)胞的總RNA，進(jìn)行全基因組表達(dá)譜分析，篩查差異表達(dá)基因并進(jìn)行GO分析。（3）NSCs凋亡的檢測(cè)。采用transwell共培養(yǎng)體系，上室中加入2×10~5、1×10~6、5×10~6個(gè)速殖子，與下室中NSCs共培養(yǎng)12h、24h和48h后，收集下室NSCs細(xì)胞，運(yùn)用Annexin V-FITC/PI雙染法和DNALadder法檢測(cè)NSCs的凋亡情況。（4）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路抑制劑預(yù)處理后NSCs的凋亡情況及相關(guān)蛋白分子的表達(dá)水平。分別用0.5mmol/L TUDCA和4μmol/LZ-ATAD-FMK預(yù)處理NSCs6h，然后建立共培養(yǎng)體系，感染48h后收集細(xì)胞，AnnexinV-FITC/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，免疫印跡檢測(cè)CHOP、caspase12、JNK、p-JNK的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果（1）成功制備小鼠胚胎NSCs并在體外傳代培養(yǎng)，NSCs特異性標(biāo)記蛋白nestin表達(dá)陽(yáng)性。（2）基因表達(dá)譜芯片篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，弓形蟲共培養(yǎng)48h的NSCs有973個(gè)基因表達(dá)上調(diào)（≥2倍）、871個(gè)基因表達(dá)下調(diào)（≤2倍）。GO分析顯示細(xì)胞凋亡生物學(xué)過(guò)程受到顯著影響，，有15個(gè)參與此過(guò)程的基因表達(dá)明顯升高（≥2倍）。（3）NSCs與弓形蟲共培養(yǎng)12h、24h、48h后，其凋亡率分別為26.21±0.78%、37.01±1.23%和45.70±0.56%，而對(duì)照組的凋亡率分別為21.12±1.34%、25.13±2.07%和25.31±1.03%，弓形蟲與NSCs共培養(yǎng)24h和48h后，感染組的凋亡率與對(duì)照組相比存在顯著性差異(P＜0.01），同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，感染組的凋亡率有逐漸增加的趨勢(shì)。2×10~5、1×10~6、5×10~6個(gè)RH速殖子共培養(yǎng)組的NSCs在48h的凋亡率為分別為36.72±4.52%、45.73±2.42%和56.94±1.35%，明顯高于對(duì)照組的27.52±1.80%。(4）TUDCA和Z-ATAD-FMK預(yù)處理組，NSCs的凋亡率分別為28.41±0.60%和27.63±0.82%與單純弓形蟲共培養(yǎng)組的凋亡率（52.92±0.95%和49.81±0.91%）相比，抑制劑明顯降低了NSCs的凋亡水平（P0.01）。（5）免疫印跡顯示,共培養(yǎng)組NSCs的CHOP、caspase12和p-JNK表達(dá)上調(diào)或激活；TUDCA預(yù)處理可抑制上述基因的表達(dá)或信號(hào)通路的激活,而Z-ATAD-FMK預(yù)處理僅抑制caspase12的表達(dá)水平。然而，與對(duì)照組相比，感染組和抑制劑預(yù)處理組的JNK表達(dá)水平未出現(xiàn)顯著性變化。 結(jié)論(1)弓形蟲ESA誘導(dǎo)NSCs的凋亡，并呈現(xiàn)出時(shí)間和劑量依賴性。(2)弓形蟲ESA可通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路來(lái)誘導(dǎo)NSCs的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干細(xì)胞 弓形蟲ESA 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382.5
【目錄】：

• 英文縮略詞匯表6-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 1 前言12-15
• 2 材料與方法15-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)蟲株15
• 2.1.3 主要試劑15-16
• 2.1.4 主要試劑的配制16-18
• 2.1.5 主要儀器18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-27
• 2.2.1 弓形蟲RH株速殖子的復(fù)蘇和凍存19
• 2.2.2 小鼠弓形蟲感染傳代及弓形蟲速殖子的收集19
• 2.2.3 胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的制備及傳代19-21
• 2.2.4 免疫熒光染色法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞21
• 2.2.5 弓形蟲與神經(jīng)干細(xì)胞 transwell 共培養(yǎng)體系的建立21-22
• 2.2.6 神經(jīng)干細(xì)胞的基因表達(dá)譜芯片分析22-23
• 2.2.7 神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的檢測(cè)23-24
• 2.2.8 Western Blot 檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)24-26
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法26-27
• 3 結(jié)果27-34
• 3.1 神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)和免疫熒光法鑒定結(jié)果27-28
• 3.2 基因表達(dá)譜芯片篩查結(jié)果28-30
• 3.3 弓形蟲共培養(yǎng)對(duì)NSCs凋亡水平的影響30-32
• 3.3.1 FCM檢測(cè)NSCs凋亡的結(jié)果30-32
• 3.3.2 DNA Ladder 檢測(cè) NSCs 凋亡的結(jié)果32
• 3.4 抑制劑預(yù)處理對(duì)NSCs凋亡水平及ERS凋亡通路活化的影響32-34
• 3.4.1 抑制劑預(yù)處理對(duì)NSCs凋亡水平的影響32-33
• 3.4.2 抑制劑預(yù)處理對(duì)ERS凋亡通路活化的影響33-34
• 4 討論34-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 附一 個(gè)人簡(jiǎn)歷45-46
• 附二 致謝46-47
• 附三 綜述47-54
• 參考文獻(xiàn)52-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 張居作;陳漢忠;徐君飛;;我國(guó)弓形蟲的感染現(xiàn)狀[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年07期

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5 包安裕;王惠玲;王高華;董惠芬;郭毅;蔣明森;;弓形蟲慢性感染小鼠腦內(nèi)包囊分布的研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2006年09期

  本文關(guān)鍵詞：弓形蟲排泄分泌抗原（ESA）通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：374093