本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒I型UL43基因體外表達及功能初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 體外構(gòu)建HSV-1UL43真核表達載體，利用生物信息學分析結(jié)果，在體外對其表達的蛋白質(zhì)的功能進行初步研究，為探究UL43編碼蛋白質(zhì)與藥物作用的靶點打下基礎(chǔ)。 方法： 1.利用生物信息學DNAStar軟件，Protpara軟件soPMA程序ESyPred3D程序http://bp.nuap.nagoya-u.ac.jp/sosui/；http://mendel.imp.ac.at/sat/DAS/DAS.html等網(wǎng)站或程序?qū)SV-1UL43遺傳進化樹和UL43p結(jié)構(gòu)和功能進行預測和分析。 2.利用基因工程原理方法，構(gòu)建HSV-1UL43用于體外表達的T克隆載體和真核表達載體。 3.構(gòu)建HSV-1膜融合過程中必要的四種基本糖蛋白(gB，gD，gH-gL)T克隆載體以及真核表達載體。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效應細胞，細胞免疫酶聯(lián)分析，體外分析UL43p在細胞到細胞膜融合過程中的作用。 結(jié)果: 1. HSV-1UL43基因存在于α和γ類皰疹病毒中，并與猴類同源性較高，與同為人類皰疹病毒的HHV-3及HHV-8同源性較低。但結(jié)構(gòu)顯示Prv UL43同源性與HSV-1較高。 2. HSV-1UL43p中磷酸化位點較為豐富。UL43p跨膜結(jié)構(gòu)綜合預測為8跨膜，與PrvUL43p相類似。 3.體外構(gòu)建的克隆載體和真核表達載體經(jīng)測序后，其序列與實際情況相符。HSV-1UL43p分子量為34kDa。 4.細胞免疫酶聯(lián)反應顯示UL43p有抑制膜融合的作用，其效果呈劑量依賴性。 結(jié)論:作為單純皰疹病毒編碼的跨膜蛋白，HSV-1UL43p與HSV-1UL20p等非糖蛋白類似，在細胞到細胞膜融合過程中發(fā)揮著“剎車員”的作用：具有抑制膜融合的效果。
【關(guān)鍵詞】：單純皰疹病毒1型 跨膜蛋白 細胞到細胞膜融合 抑制現(xiàn)象
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R373
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 目錄6-9
• 主要英文縮略詞表9-10
• 第一章 前言10-27
• 1.1 皰疹病毒感染性10-11
• 1.2 HSV-1UL43 基因11-15
• 1.3 生物信息學15-16
• 1.4 生物信息學的研究方向16-18
• 1.4.1 序列比對16-17
• 1.4.2 蛋白質(zhì)的分析17-18
• 1.4.3 蛋白質(zhì)功能性預測18
• 1.5 病毒侵入的方式18-21
• 1.6 皰疹病毒融合機制21-22
• 1.7 病毒誘導的膜融合和自我抑制現(xiàn)象22-24
• 1.8 無病毒細胞融合模型24-25
• 1.9 本研究目的、意義和內(nèi)容25-27
• 第二章 HSV-1UL43 基因遺傳信息學分析27-36
• 2.1 實驗目的27
• 2.2 主要生物分析軟件和網(wǎng)站27
• 2.3 實驗方法27-28
• 2.3.1 HSV-1 UL43 基因以及其同源基因核苷酸序列遺傳進化樹分析27
• 2.3.2 HSV-1 UL43 基因以及其同源基因核苷酸序列多重比對27
• 2.3.3 HSV-1 和 Prv UL43p 基本特性分析27
• 2.3.4 HSV-1 UL43p 立體構(gòu)象分析27-28
• 2.3.5 HSV-1 UL43p 和 Prv UL43p 疏水性分析28
• 2.3.6 HSV-1 UL43p 和 Prv UL43p 跨膜結(jié)構(gòu)分析28
• 2.3.7 HSV-1 UL43p 和 Prv UL43p 磷酸化位點預測28
• 2.4 實驗結(jié)果28-34
• 2.4.1 遺傳進化樹分析28-29
• 2.4.2 核苷酸及氨基酸同源比對29-30
• 2.4.3 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析30-31
• 2.4.4 二級結(jié)構(gòu)預測31
• 2.4.5 蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)預測31-32
• 2.4.6 蛋白質(zhì)疏水性分析32
• 2.4.7 蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)預測和分析32-33
• 2.4.8 蛋白質(zhì)磷酸化位點預測33-34
• 2.5 本章小結(jié)34-36
• 第三章 HSV-1UL43 基因載體構(gòu)建以及體外表達36-45
• 3.1 實驗目的36
• 3.2 主要實驗材料及試劑36-38
• 3.2.1 實驗材料36
• 3.2.2 主要試劑配制方法36-38
• 3.2.3 主要實驗儀器38
• 3.3 實驗方法38-42
• 3.3.1 病毒的擴增38
• 3.3.2 UL43 基因的克隆和測序38-39
• 3.3.3 PCR 產(chǎn)物的純化和回收:39
• 3.3.4 目的片段與克隆載體體外重組39-40
• 3.3.5 感受態(tài)細胞的制備40
• 3.3.6 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化40
• 3.3.7 克隆載體的鑒定40
• 3.3.8 質(zhì)粒的鑒定與提取40-41
• 3.3.9 構(gòu)建 HSV-1UL43 真核表達載體及鑒定表達后目的蛋白41-42
• 3.4 結(jié)果42-44
• 3.4.1 HSV-1UL43 基因的克隆和測序42-43
• 3.4.2 PCR 鑒定重組質(zhì)粒43-44
• 3.4.3 HSV-1UL43 基因的表達44
• 3.5 本章小結(jié)44-45
• 第四章 HSV-1 UL43p 功能初步研究45-60
• 4.1 實驗目的45
• 4.2 主要實驗材料及試劑45-46
• 4.2.1 瞬時轉(zhuǎn)染試劑與材料45
• 4.2.2 CELISA 試劑與材料45-46
• 4.2.3 細胞融合分析試劑與材料46
• 4.3 實驗方法46-53
• 4.3.1 HSV-1 糖蛋白 gB, gD, gH, gL 克隆載體構(gòu)建46-49
• 4.3.2 HSV-1 糖蛋白 gB, gD, gH, gL 真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建49-50
• 4.3.3 Westemblot 鑒定分析50
• 4.3.4 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 COS 細胞:50
• 4.3.5 瞬時轉(zhuǎn)染方法50
• 4.3.6 細胞內(nèi)和細胞表面表達總方法50-51
• 4.3.7 細胞融合分析方法51-52
• 4.3.8 注意事項52-53
• 4.4 結(jié)果53-59
• 4.4.1 HSV-1gB,gD,gH,gL 基因擴增及測序53-54
• 4.4.2 特異性抗體鑒定蛋白質(zhì)的表達54-55
• 4.4.3 COS 細胞中 HSV-1 糖蛋白的表達55-56
• 4.4.4 無病毒細胞融合模型效果56-57
• 4.4.5 UL43p 在膜融合過程中的作用57-59
• 4.5 本章小結(jié)59-60
• 第五章 討論60-65
• 第六章 結(jié)論和展望65-67
• 6.1 全文總結(jié)65
• 6.2 展望65-67
• 參考文獻67-77
• 攻讀碩士學位期間論文發(fā)表情況77-78
• 致謝78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張春霆;生物信息學的現(xiàn)狀與展望[J];中國青年科技;2001年01期

  本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒I型UL43基因體外表達及功能初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：371866