目的：分析Ⅲ型組蛋白去乙�；窼IRT1對間充質干細胞C3H10T1/2成脂分化的影響，探討SIRT1參與間充質干細胞成脂分化過程的分子作用機制。 方法：1.建立成脂分化的體外模型，繪制C3H10T1/2細胞生長曲線，選擇對數生長期細胞進行成脂分化誘導；RT-qPCR檢測SIRT1的激動劑resveratrol和抑制劑EX-527對C3H10T1/2細胞中SIRT1表達的影響；并利用流式細胞術和MTT檢測resveratrol和EX-527對C3H10T1/2細胞增殖活性和細胞周期的影響。2. Western blot檢測C3H10T1/2細胞成脂分化過程中PPAR-γ水平的變化；RT-qPCR檢測經由resveratrol和EX-527聯合ADM處理C3H10T1/2后細胞中成脂分化關鍵轉錄因子表達的變化，分析SIRT1可能參與這一變化的作用機制。油紅O染色及半定量檢測成脂分化效果。 結果：1.成功建立了間充質干細的體外成脂分化模型；resveratrol處理后，C3H10T1/2細胞中SIRT1mRNA水平上表達上升，而由EX-527處理后C3H10T1/2細胞中SIR... 

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 前言
    1.1 sirtuin 蛋白概述
    1.2 間充質干細胞概述
    1.3 sirt1 與細胞分化
    1.4 肥胖與成脂分化
    1.5 研究目的和意義
    1.6 研究技術路線
    1.7 論文創(chuàng)新點
2 實驗材料與儀器
    2.1 實驗細胞
    2.2 主要試劑
    2.3 本實驗中所用的主要試劑配制方法
    2.4 主要實驗儀器
3 實驗方法
    3.1 細胞的培養(yǎng)
    3.2 繪制細胞生長曲線
    3.3 MTT 檢測 resveratrol 和 EX-527 對細胞增殖的影響
    3.4 流式細胞術檢測 resveratrol 和 EX-527 對細胞周期的影響
    3.5 驗證間充質干細胞 C3H10T1/2 的多向分化潛能
    3.6 Western blotting 技術檢測 resveratrol 和 EX-527 對成脂分化過程中細胞的PPAR-γ表達水平的影響
    3.7 油紅 O 染色檢測 resveratrol 和 EX-527 對 C3H10T1/2 細胞成脂分化的影響
    3.8 實時熒光定量 PCR 檢測 resveratrol 和 EX-527 對 C3H10T1/2 細胞成脂分化的影響
    3.9 統計學分析
4 結果
    4.1 S 型的細胞生長曲線
    4.2 MTT 檢測細胞增殖活性
    4.3 流式細胞術檢測 C3H10T1/2 的細胞周期分布
    4.4 C3H10T1/2 具有多向分化潛能
    4.5 Western Blot 檢測不同濃度的 resveratrol 和 EX-527 對 C3H10T1/2 細胞成脂分化關鍵轉錄因子 PPAR-γ的影響
    4.6 油紅 O 染色檢測兩種藥物對細胞成脂分化的影響
    4.7 RT-qPCR 檢測成脂分化標志因子及關鍵轉錄因子的表達
5 討論
    5.1 resveratrol 抑制 C3H10T1/2 細胞增殖并抑制其向成脂細胞分化
    5.2 HDAC 與成脂分化
    5.3 sirt1 通過影響 PPAR-γ在細胞中的表達水平來調節(jié)成脂分化
6 結論
參考文獻
在校發(fā)表論文情況
致謝



本文編號：3706030