發(fā)布時(shí)間：2017-05-16 00:11

  本文關(guān)鍵詞：在H1299細(xì)胞中Apak對(duì)突變型p53R175H的調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：p53作為目前為止研究的比較全面的抑癌基因，它在抵抗腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用，p53抑癌功能的喪失幾乎是腫瘤發(fā)生發(fā)展所必需的，這種功能缺失可直接來(lái)源于p53基因的突變，大約50%人類癌癥中存在著p53突變[1]。P53突變是人類Li-Fraumeni綜合征的主要病因，患者經(jīng)家族遺傳途徑獲得基因組內(nèi)p53突變，導(dǎo)致他們?cè)谠缒昙搭净级喾N腫瘤，且腫瘤表型與p53突變類型緊密相關(guān)[10]。P53突變經(jīng)常發(fā)生在p53與DNA結(jié)合的保守區(qū)域，使得p53不再結(jié)合DNA或者使p53失去認(rèn)識(shí)其靶基因的能力[2]。當(dāng)p53發(fā)生突變后，會(huì)喪失野生型p53所具有的細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)凋亡發(fā)生、介導(dǎo)細(xì)胞衰老、維護(hù)基因組穩(wěn)定、錯(cuò)配DNA堿基修復(fù)等抑癌基因功能，這稱為突變型p53的“功能缺失（”loss of function）[3]。與此同時(shí)，突變型的p53獲得了癌基因的功能，如轉(zhuǎn)錄一系列靶基因加速癌癥進(jìn)程、增強(qiáng)化療藥物的耐藥性、阻止癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生、抑制p63、p73活性等，這一過(guò)程被稱為突變型p53“功能獲得”（gain of function）[4]。而且，從功能上說(shuō)，突變型p53還可以通過(guò)顯性負(fù)效應(yīng)抑制野生型p53的活性[5，6]。正是由于突變型的p53所具有的這些特性，遂成為癌癥研究中的熱點(diǎn)。專家們之前的研究已經(jīng)證明p53有很多的突變位點(diǎn)，但有幾個(gè)是腫瘤中經(jīng)常突變的位點(diǎn)，我們稱之為突變熱點(diǎn)，包括R175、G245、R248、R249、R273、R282。而p53蛋白最經(jīng)常發(fā)生突變的位點(diǎn)是175和273，p53R175H是第175位的精氨酸突變成組氨酸，突變型p53R175H是經(jīng)典的結(jié)構(gòu)突變類型，在生理?xiàng)l件下突變型p53是高度的平展?fàn)顟B(tài)，而突變型p53R175H的突變這在很大程度上會(huì)影響p53蛋白的折疊，進(jìn)一步影響p53蛋白的穩(wěn)定性，從而改變p53蛋白的功能，所以可以表現(xiàn)出一系列的功能缺失。已經(jīng)有研究表明突變型p53R175H可以阻止wt p53結(jié)合其下游的靶基因從而抑制wt p53的功能[7]同時(shí)也表現(xiàn)出了它的“功能獲得”作用，，它可以轉(zhuǎn)錄激活原本被wt p53抑制的基因[8]，也可以抑制由DNA損傷造成的細(xì)胞凋亡[9]。 在早期的工作當(dāng)中，我們認(rèn)識(shí)到Apak（ATM and p53associated KRAB-typezinc finger protein，也稱為ZNF420）這個(gè)分子。Apak屬于KRAB型鋅指蛋白（KZNFs）家族成員，KZNFs通常參與基因的轉(zhuǎn)錄抑制。它作為p53的負(fù)調(diào)控分子，有效地抑制p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，而對(duì)細(xì)胞周期阻滯及其它p53參與的生理功能沒(méi)有明顯調(diào)控作用。它能夠選擇性地下調(diào)凋亡相關(guān)的p53靶基因表達(dá)，抑制p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中它通過(guò)KAP1募集ATM（蛋白激酶）和HDAC1（組蛋白去乙酰化酶）與p53形成復(fù)合體，抑制p53的乙酰化，從而協(xié)同發(fā)揮對(duì)p53的負(fù)調(diào)控功能。而在DNA損傷條件下，ATM被激活，磷酸化狀態(tài)的Apak與p53解離，同時(shí)解除對(duì)p53的抑制，促使p53激活，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生[11]。而我們實(shí)驗(yàn)室的研究又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)可以與p53競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合p53應(yīng)激元件的蛋白Apak，豐富了p53選擇性調(diào)控機(jī)制。鑒定到Apak分子是p53AIP1基因的第一個(gè)直接轉(zhuǎn)錄抑制因子，為p53AIP1基因的表達(dá)調(diào)控研究提供了基礎(chǔ)。同時(shí)Apak蛋白屬于哺乳動(dòng)物中最大的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子家族---KRAB鋅指蛋白（又稱作KZNF）家族，其成員數(shù)量多達(dá)400多個(gè)，在結(jié)構(gòu)上非常保守，但各自的功能卻不清楚，這個(gè)研究為家族中其他成員作用機(jī)制的研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 研究表明，p53R175H可以像wt p53一樣在DNA損傷應(yīng)激下可以穩(wěn)定它的蛋白水平也可以像wt p53一樣被Hdm2（E3）所降解[12]，那p53R175H是否也可以像wtp53一樣被Apak所調(diào)控呢？本研究進(jìn)一步研究Apak對(duì)突變型p53R175H的調(diào)控研究，完善Apak調(diào)控的功能機(jī)制，鑒定到Apak對(duì)于突變型p53R175H失去的調(diào)控能力。
【關(guān)鍵詞】：Apak 野生型 p53 突變型p53
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• Apak 對(duì)突變型 p53R175H 在 H1299 細(xì)胞中的調(diào)控6-28
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-25
• 討論25-27
• 結(jié)論27-28
• 第二部分：ARF 對(duì) Apak 的 Sumo 修飾作用28-37
• 中文摘要28-29
• Abstract29-30
• 前言30-31
• 結(jié)果31-35
• 討論35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 附錄40-42
• 致謝42-44
• 綜述44-55
• 參考文獻(xiàn)50-55

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