發(fā)布時(shí)間：2022-05-02 23:29

　　目的為研究肺炎克雷伯菌產(chǎn)CTX-M-14型ESBL基因的基因環(huán)境及其傳播機(jī)制。方法本試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)CTX-M-14型ESBL基因進(jìn)行質(zhì)粒接合傳遞試驗(yàn);對(duì)陽性接合子進(jìn)行質(zhì)粒抽提并酶切,PBR322載體連接并轉(zhuǎn)化,將轉(zhuǎn)化子進(jìn)行測(cè)序,進(jìn)行Blast比對(duì)研究基因環(huán)境。結(jié)果質(zhì)粒接合試驗(yàn)表明,產(chǎn)CTX-M-14型ESBL基因的陽性菌株能通過質(zhì)粒接合試驗(yàn)傳遞耐藥性,CTX-M-14基因可經(jīng)質(zhì)粒傳遞,接合子的耐藥表型與供體菌基本一致,具有與供體菌相似的耐藥表型,僅個(gè)別藥物的MIC值較供體菌有所降低。在含頭孢噻肟平板上篩選的含CTX-M-14基因的陽性轉(zhuǎn)化子對(duì)頭孢噻肟耐藥,而對(duì)其它大多數(shù)藥物表現(xiàn)敏感。產(chǎn)CTX-M-14型ESBL基因的基因環(huán)境表明,陽性轉(zhuǎn)化子含有2 637 bp的目的基因序列,經(jīng)Blast比對(duì),該轉(zhuǎn)化子序列的基因環(huán)境結(jié)構(gòu)元件包括上游插入序列ISEcp1、-35區(qū)和-10區(qū)、重復(fù)序列IRR、876 bp的CTX-M-14基因開放閱讀框及下游插入序列IS903和IRL,上傳NCBI獲基因序列號(hào)為HQ650134。結(jié)論產(chǎn)CTX-M-14型ESBL菌株的耐藥情況較嚴(yán)重,臨床菌可通過接合方式編碼ESBL... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材 料
        1.1.1 菌株來源
        1.1.2 培養(yǎng)基
        1.1.3 藥物
        1.1.4 試劑
        1.1.5 儀器
    1.2 方 法
        1.2.1 CTX-M-14型ESBL基因的質(zhì)粒接合傳遞試驗(yàn)
            1.2.1.1 供體菌(標(biāo)號(hào)F1)與受體菌(E. coli C600)接合
            1.2.1.2 陽性接合子的篩選與確認(rèn)
            1.2.1.3 陽性接合子的的MIC值檢測(cè)
            1.2.1.4 陽性接合子的PCR檢測(cè)
        1.2.2 CTX-M-14型ESBL的基因環(huán)境
            1.2.2.1 接合子質(zhì)粒雙酶切
            1.2.2.2 PBR322克隆載體雙酶切
            1.2.2.3 連接轉(zhuǎn)化
            1.2.2.4 陽性轉(zhuǎn)化子的篩選及雙酶切鑒定
            1.2.2.5 陽性轉(zhuǎn)化子的MIC值檢測(cè)
            1.2.2.6 核苷酸序列測(cè)定與分析
            1.2.2.7 CTX-M-14型基因上下游分析
2 結(jié) 果
    2.1 質(zhì)粒接合傳遞試驗(yàn)結(jié)果
    2.2 接合子質(zhì)粒及PBR322載體雙酶切結(jié)果
    2.3 陽性轉(zhuǎn)化子雙酶切鑒定結(jié)果
    2.4 耐藥表型的測(cè)定結(jié)果
    2.5 轉(zhuǎn)化子核苷酸序列測(cè)定結(jié)果
    2.6 含CTX-M-14型ESBL的基因上下游分析
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3650172