本文關鍵詞：呼吸道合胞病毒感染小膠質(zhì)細胞活化Toll樣受體3、7介導炎性反應的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）感染小膠質(zhì)細胞（BV2）后，Toll樣受體3（Toll-like receptor3, TLR3）和Toll樣受體7（Toll-like7receptor, TLR7）水平的變化，初步研究TLR3和TLR7介導產(chǎn)生的下游炎性因子在神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染中表現(xiàn)出的炎性反應，為臨床RSV感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)的預防和治療提供新的思路。方法（1）RSV感染體外培養(yǎng)的BV2，免疫熒光法分12、24、和36h檢測RSV融合 蛋白（F蛋白），觀察RSV是否可以感染BV2。（2）分別于感染4、8、12、16、24、和36h收集細胞，以未感染細胞作為對照組。用Trizol提取細胞總RNA，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測TLR3、TLR7的mRNA表達量的變化。（3）免疫印跡法（Western-blot）檢測RSV感染4、8、12、16、24、和36h核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)蛋白水平的變化，以未感染細胞作為對照組。（4）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測感染不同時間點細胞上清中TNF-α含量的變化，以未感染細胞作為對照組。 結(jié)果（1）免疫熒光結(jié)果顯示，和陰性對照比較，RSV感染BV2后12、24、36h可見在DAPI染色對照的細胞部位均可以見FITC標記RSV-F蛋白的綠色熒光，而陰性對照未見。并且該熒光呈增強趨勢，有時間依賴性，。（2）RT-PCR法測定結(jié)果顯示，正常組中TLR3、TLR7mRNA轉(zhuǎn)錄水平較低，，而在RSV感染組，隨著感染時間增加TLR3、TLR7mRNA轉(zhuǎn)錄水平不斷提高。感染后4、8、12、16、24、36h不同時點感染組TLR3、TLR7mRNA轉(zhuǎn)錄水平均高于正常組，差異均有統(tǒng)計學意義，且在感染組中TLR3、TLR7mRNA轉(zhuǎn)錄水平有隨時間延長而呈升高趨勢，各時點間差異有統(tǒng)計學意義。 （3）Western blot法測定結(jié)果顯示，正常組中NF-κB蛋白水平表達量較低，而在RSV感染組，隨著感染時間增加NF-κB表達不斷上調(diào)。感染后4、8h升高未見統(tǒng)計學意義，而從12、16、24、36h，各時點感染組NF-κB蛋白表達水平均高于正常組，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.01），且在感染組中，NF-κB蛋白表達水平有隨時間延長而呈升高趨勢，各時點間差異有統(tǒng)計學意義。（4）ELISA法的檢測結(jié)果顯示，正常組中TNF-α含量較低，而在RSV感染組，隨著感染時間增加TNF-α含量不斷提高。感染后4、8、12、16、24、36h，不同時點感染組TNF-α含量均高于正常組，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.01），且在感染組中，TNF-α含量有隨時間延長而呈升高趨勢，各時點間差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論RSV可以感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小膠質(zhì)細胞BV2，活化TLR3、TLR7后誘導NF-κB的上調(diào)，從而使下游細胞炎性因子TNF-α分泌升高，過度的炎性反應可能與神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的發(fā)生相關。
【關鍵詞】：呼吸道合胞病毒 Toll樣受體3 Toll樣受體7 小膠質(zhì)細胞 NF-κB TNF-α
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.14
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料與方法14-28
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 病毒和細胞14
• 2.1.2 試劑14-15
• 2.1.3 儀器和設備15
• 2.2 方法15-27
• 2.2.1 溶液的配制15-17
• 2.2.2 RSV 增殖及感染量測定17-18
• 2.2.3 細胞模型建立和實驗分組18-19
• 2.2.4 免疫熒光法檢測 RSV-F 蛋白在 BV2 細胞內(nèi)表達19-20
• 2.2.5 TLR3,TLR7 在 RSV 感染組 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的檢測20-22
• 2.2.5.1 BV2 細胞總 RNA 提取20
• 2.2.5.2 RNA 定性與定量分析20-21
• 2.2.5.3 兩步 RT-PCR 方法檢測21-22
• 2.2.5.4 瓊脂糖凝膠電泳檢測 PCR 結(jié)果22
• 2.2.6 BV2 細胞內(nèi) NF-κB 蛋白的 Western blot 檢測22-26
• 2.2.6.1 總蛋白樣本的制備22-23
• 2.2.6.2 Lowry 法蛋白定量23-24
• 2.2.6.3 蛋白免疫印跡（western blot）法檢測 NF-κB 的蛋白表達24-26
• 2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測 TNF-α在細胞上清中含量26-27
• 2.3 統(tǒng)計學分析27-28
• 3. 結(jié)果28-35
• 3.1 R S V 毒力的測定28
• 3.2 RSV 感染 BV2 后 CPE 的觀察28-29
• 3.3 RSV 感染 BV2 免疫熒光檢測29-30
• 3.4 TLR3、TLR7 在 RSV 感染組 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果30-32
• 3.4.1 TLR3 mRNA 在各組不同時間點的表達結(jié)果30-31
• 3.4.2 TLR7 mRNA 在各組不同時間點的表達結(jié)果31-32
• 3.5 BV2 細胞 NF-κB 的蛋白水平變化結(jié)果32-34
• 3.6 BV2 細胞上清中 TNF-α含量的變化結(jié)果34-35
• 4. 討論35-40
• 5. 結(jié)論40
• 參考文獻40-46
• 附錄46-47
• 致謝47-48
• 綜述48-58
• 參考文獻55-58

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳兆紅;華青;舒志榮;趙園園;馬凱;徐以鳳;王甜甜;;IL-10在單純皰疹病毒性腦炎小鼠腦中的表達及其機制的研究(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2012年09期

2 趙麗麗;趙平森;齊瑛琳;梁紅茹;金宏麗;梁萌;王化磊;楊松濤;夏咸柱;;小膠質(zhì)細胞在病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中的作用[J];中國病原生物學雜志;2012年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王笑亮;Nrf2-ARE通路在大鼠脊髓損傷后的神經(jīng)保護作用[D];南京大學;2011年

  本文關鍵詞：呼吸道合胞病毒感染小膠質(zhì)細胞活化Toll樣受體3、7介導炎性反應的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：363210