發(fā)布時間：2017-05-12 22:03

  本文關(guān)鍵詞：不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對原代乳鼠心肌細(xì)胞影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳鼠心肌細(xì)胞人工體外培養(yǎng)技術(shù)由Harary在1960年創(chuàng)立,經(jīng)過半個多世紀(jì)的發(fā)展,現(xiàn)已成為心血管研究領(lǐng)域一門十分重要的成熟的基礎(chǔ)技術(shù),廣泛應(yīng)用于心肌生理、心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷、心肌再生等研究。葡萄糖作為乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分之一,對心肌細(xì)胞的生長、增殖和功能狀態(tài)維持等都具有重大影響。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、修飾和正確折疊等生理功能的細(xì)胞器,對細(xì)胞和機(jī)體至關(guān)重要。然而,當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受某些因素影響導(dǎo)致未折疊或錯誤折疊蛋白蓄積時,將引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究發(fā)現(xiàn),ERS參與了許多疾病的發(fā)生,如肥胖、糖尿病、腫瘤和心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷等,還可能與糖尿病心肌病有關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)是應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)預(yù)留蛋白,是維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)劑,也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的經(jīng)典標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)通過觀測細(xì)胞形態(tài)學(xué)及活性的改變、GRP78在蛋白及基因水平表達(dá)量的變化,并以衣霉素處理組作為陽性對照,探討不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對原代乳鼠心肌細(xì)胞的影響關(guān)系。 目的：通過觀察原代乳鼠心肌細(xì)胞在不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基作用下細(xì)胞形態(tài)學(xué)、活性以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況,以探討葡萄糖對原代乳鼠心肌細(xì)胞的影響關(guān)系。 方法：使用不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基(葡萄糖濃度分別為5.6mmol/L(低糖)、11.1mmol/L(中糖)、25mmol/L(高糖))原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞；以加入1mg/L或5mg/L衣霉素孵育心肌細(xì)胞6h、12h或24h作為陽性對照。然后對各實(shí)驗(yàn)分組在高倍倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)及搏動狀況,CCK-8法檢測細(xì)胞活性,HE染色后觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并用Western blot法、RT-PCR法檢測GRP78的表達(dá)水平。 結(jié)果：高糖培養(yǎng)基及中糖培養(yǎng)基組乳鼠心肌細(xì)胞明顯較低糖培養(yǎng)基組生長更旺盛、增殖數(shù)量更多、伸出偽足更多、形態(tài)學(xué)評分更高、搏動頻率更高、細(xì)胞活性更好(p0.01),高糖培養(yǎng)基組與中糖培養(yǎng)基組之間差異不明顯；高糖培養(yǎng)基組心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)量無論是在蛋白水平還是在基因水平都較中糖培養(yǎng)基組及低糖培養(yǎng)基組明顯升高(p0.01),甚至達(dá)到了陽性對照組的水平,而中糖培養(yǎng)基組和低糖培養(yǎng)基組GRP78表達(dá)量之間無顯著差異；陽性對照組中加入1mg/L或5mg/L衣霉素孵育6h、12h或24h組之間的GRP78蛋白表達(dá)量無明顯差異。 結(jié)論：高糖培養(yǎng)基誘發(fā)了原代乳鼠心肌細(xì)胞顯著的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
【關(guān)鍵詞】：葡萄糖 高糖 心肌細(xì)胞 GRP78 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 目錄10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料和方法13-28
• 3 結(jié)果28-38
• 4 討論38-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 綜述48-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 作者簡歷及在學(xué)期間發(fā)表的文章63

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4 閆Y

本文編號：360925