本文關(guān)鍵詞：豬附紅細(xì)胞體重組DNA疫苗pVAX1-ORF2的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 構(gòu)建豬附紅細(xì)胞體重組DNA疫苗pVAX1-ORF2，將重組DNA疫苗質(zhì)粒接種于C57BL/6小鼠，檢測(cè)C57BL/6血清中的特異性抗體IgG水平，脾T淋巴細(xì)胞亞類數(shù)量CD4+、CD8+，Th1\Th2類細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4，探討豬附紅細(xì)胞體重組DNA疫苗pVAX1-ORF2誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。為進(jìn)一步進(jìn)行豬附紅細(xì)胞體重組DNA疫苗的臨床實(shí)驗(yàn)研究乃至產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。 方法 利用全基因合成技術(shù)獲取豬附紅細(xì)胞體AJ504999序列中ORF2基因片段，ORF2基因克隆入pMD18-T vector，，經(jīng)測(cè)序正確后連接于真核表達(dá)載體pVAX1，構(gòu)建含有目的基因的重組質(zhì)粒pVAX1-ORF2。將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為3組，A組接種pVAX1-ORF2陽(yáng)性重組質(zhì)粒，B組接種pVAX1空質(zhì)粒為陰性對(duì)照組，C組接種PBS為空白對(duì)照組，每次向C57BL/6小鼠的雙側(cè)后肢脛前肌注射100μg藥液。共免疫3次，每次間隔1周。于第1次免疫后按0、1、2、3、4周斷尾取血，取上清，-200C保存?zhèn)淇贵wIgG檢測(cè)用。于第4周斷頭取血，同時(shí)無(wú)菌取小鼠脾臟制備脾細(xì)胞懸液，用ELISA方法檢測(cè)血清中特異性抗體IgG與Th1\Th2類細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4水平變化，用流式細(xì)胞術(shù)分析脾T淋巴細(xì)胞亞類數(shù)量CD4+、CD8+。 結(jié)果 1、應(yīng)用全基因合成技術(shù)獲得了豬附紅細(xì)胞體AJ504999中ORF2基因。 2、成功構(gòu)建了豬附紅細(xì)胞體重組質(zhì)粒pVAX1-ORF2。 3、在不同時(shí)間點(diǎn)采樣對(duì)小鼠血清進(jìn)行的抗體檢測(cè)結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pVAX1-ORF2在第1次免疫小鼠后1周，即可檢測(cè)出明顯的IgG抗體，且最高值出現(xiàn)在第3次免疫后1周，所測(cè)OD450nm值均顯著高于空載體pVAX1對(duì)照組和空白對(duì)照組（P0.05）；重組質(zhì)粒pVAX1-ORF2免疫組的CD4+和CD8+的淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)極顯著高于空載體pVAX1對(duì)照組和空白對(duì)照組（P0.01），且CD4+/CD8+比值顯著高于對(duì)照組（P0.05）；重組疫苗質(zhì)粒pVAX1-ORF2免疫組小鼠較空載體pVAX1對(duì)照組分泌較高水平Th1\Th2類細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4（P0.01）。與空載體pVAX1對(duì)照組和空白對(duì)照PBS組相比，重組疫苗質(zhì)粒pVAX1-ORF2免疫組小鼠細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4分泌水平極顯著提高。 結(jié)論 1、豬附紅細(xì)胞體ORF2蛋白具有規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)及較強(qiáng)的免疫原性。 2、豬附紅細(xì)胞體ORF2基因片段在真核表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)成功表達(dá)構(gòu)建重組體。 3、豬附紅細(xì)胞體重組DNA疫苗質(zhì)粒pVAX1-ORF2進(jìn)行實(shí)驗(yàn)免疫研究表明，重組DNA疫苗pVAX1-ORF2使小鼠產(chǎn)生了IgG抗體，使CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量增加，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答；pVAX1-ORF2疫苗免疫組小鼠在特異性抗原肽的刺激下分泌較高水平的Th1和Th2類細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ。
【關(guān)鍵詞】：豬附紅細(xì)胞體 重組 DNA疫苗 pVAX1-ORF2 構(gòu)建 免疫
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-9
• 英文縮略語(yǔ)表9-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述39-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 在學(xué)期間科研成績(jī)49-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)介51-52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：360279