本文關(guān)鍵詞：CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其對腦內(nèi)興奮性氨基酸遞質(zhì)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的及依據(jù) 疼痛是腦的高級部位(尤其是大腦皮層)對軀體某一部位現(xiàn)有或潛在的組織損傷產(chǎn)生的一種厭惡和不愿忍受的感覺。國際疼痛研究會(IASP)將神經(jīng)病理性疼痛定義為,由于神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷或產(chǎn)生病變而導(dǎo)致的疼痛,臨床特點為自發(fā)痛、痛覺過敏和痛覺超敏。神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病率較高,患者在肉體和精神上均遭受極大的痛苦,嚴(yán)重影響了工作與生活質(zhì)量。 三叉神經(jīng)痛是神經(jīng)病理性疼痛的一種,指的是在三叉神經(jīng)分布區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)的反復(fù)發(fā)作性短暫、劇烈疼痛。多年來,科學(xué)家進行大量觀察及實驗,以期探索三叉神經(jīng)痛產(chǎn)生的機制,但至今尚不明確。能比較全面解釋原發(fā)性三叉神經(jīng)痛且被廣泛接受的主要有中樞學(xué)說、周圍學(xué)說、免疫學(xué)說、神經(jīng)肽學(xué)說等。 神經(jīng)病理性疼痛的臨床治療方面,迄今為止尚缺乏滿意的治療方法和藥物,因此開發(fā)有效的新藥并探討其作用機制成為此領(lǐng)域中亟待解決的問題。CQM為本課題組自擬處方,具有活血行氣,祛風(fēng)除濕,通絡(luò)止痛的功效,已在前期研究中顯示了對多個神經(jīng)病理性疼痛的動物模型有較好的鎮(zhèn)痛效果。 本實驗擬采用光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)痛大鼠模型,觀察CQM對大鼠三叉神經(jīng)痛行為學(xué)的影響；在動物清醒、自由活動狀態(tài)下應(yīng)用腦內(nèi)微透析技術(shù)進行采樣,觀察藥物對氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)以及能量代謝相關(guān)物質(zhì)的影響,以了解CQM發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的中樞藥理學(xué)機制,進而為臨床治療提供參考。 研究方法 1大鼠適應(yīng)性刺激、分組、造模 實驗開始前一周用不同力度的Von Frey hairs疼痛測試棒適應(yīng)性刺激大鼠待手術(shù)側(cè)(右側(cè))三叉神經(jīng)支配的顏面部觸須墊,每日連續(xù)刺激5次,直到大鼠對以上刺激反應(yīng)平靜。將連續(xù)3d痛閾大于26g(三叉神經(jīng)支配區(qū)最大痛閾為26g)的大鼠隨機分為手術(shù)組和假手術(shù)對照組(sham)。對手術(shù)組大鼠施行光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)損傷手術(shù),方法是在大鼠觸須墊后上方切口暴露、剝離眶下神經(jīng),并給動物靜脈注射光敏劑,隨后置于激光發(fā)生器下照射該神經(jīng),照射結(jié)束后縫合肌肉和皮膚。假手術(shù)組剝離眶下神經(jīng)后縫合肌肉和皮膚。造模術(shù)后連續(xù)3d痛閾小于6g的大鼠視為造模成功。將造模成功的大鼠分為模型組(model)、加巴噴丁組(gabapentin,100mg·kg-1)、CQM低劑量組(35mg·kg-1)、CQM高劑量組(70mg·kg-1),腹腔注射給藥,投與模型組和假手術(shù)對照組等量生理鹽水,每組6只大鼠。 2三叉神經(jīng)顏面部支配區(qū)機械痛閾測評方法 參照1999年Juhana等的標(biāo)準(zhǔn),將大鼠置于小鼠盒中,安靜放置10min適應(yīng)周圍環(huán)境后,用不同力度的Von Frey hairs從最小刺激強度0.008g開始,依次向最大刺激強度26g過渡,以每秒一次的頻率刺激大鼠右側(cè)觸須墊區(qū)域,將5次刺激出現(xiàn)3次陽性反應(yīng)的最小值視為三叉神經(jīng)顏面部支配區(qū)的機械痛閾值。大鼠的陽性反應(yīng)包括：(1)大鼠快速抓咬刺激物,表現(xiàn)出攻擊行為。(2)受到刺激后快速后退,為避免面部進一步受到刺激,蜷縮身體向籠壁靠攏,或?qū)㈩^面部藏在身體下。(3)連續(xù)搔抓面部受刺激區(qū)域,通常合并后退動作。 3給藥及藥效觀察 對造模成功大鼠進行三叉神經(jīng)顏面部支配區(qū)機械痛閾測評,基礎(chǔ)數(shù)據(jù)時間點坐標(biāo)為0min,為第一個時間點。通過腹腔注射對各組分別投與相應(yīng)藥物,對假手術(shù)組及模型組投與等量的生理鹽水。給藥后分別于30、60、90、120、180、240、300min進行大鼠三叉神經(jīng)顏面部支配區(qū)機械痛閾測評。 4微透析過程 給藥測評結(jié)束后,麻醉大鼠,通過腦立體定位儀將微透析探針套管埋植于大鼠右側(cè)紋狀體(A:+0.2mm, L:+3.0mm, V:-7.5mm)內(nèi)并固定于顱骨。次日在大鼠清醒狀態(tài)下輕柔抓持大鼠,將腦部微透析探針經(jīng)套管小心插入紋狀體中,并將大鼠置于清醒自由活動裝置中,進行活體腦內(nèi)微透析采樣。用復(fù)方氯化鈉以2μl·min-1的流速灌流探針,平衡60min后收集透析液,每30min收集一管。取前兩管透析液測定Glu、GABA及能量代謝相關(guān)物質(zhì)的濃度,并取均值作為0min的基礎(chǔ)水平。然后腹腔注射給藥,與行為學(xué)測評時間同步,檢測給藥后30、60、90、120、180、240、300min大鼠腦內(nèi)透析液的Glu、GABA及能量代謝相關(guān)物質(zhì)的水平。 5高效液相-熒光法分析檢測Glu、GABA水平 色譜柱為Eclipse AAA4.6mmx150mm,5pm。衍生液為120μl甲醇中加入5mgOPA、10μlβ-巰基乙醇和0.2mol·L-1硼酸緩沖液(pH值9.2)1ml混勻,避光備用。流動相分為A液與B液,緩沖液為20nmol·L-1pH值7.2的乙酸鈉溶液,A液中緩沖液：甲醇：四氫呋喃(V：V：V)=400：95：5,B液中緩沖液：甲醇(V：V)=120：380。流速0.8ml·min-1, PMT為12,柱溫為40℃。梯度洗脫0～10min為0%～63%B液,10～12min為63%B液,12～12.01min,63%～1000%B液12.01～17min為100%B液；17～18min為1000%～0%B液,18～21min為0%B液。OPA柱前自動衍生,激發(fā)波長為340nm,發(fā)射波長為455nm。 6ISCUS檢測能量代謝相關(guān)物質(zhì)水平 將葡萄糖、乳酸、丙酮酸、甘油四種分析試劑依次放入ISCUS檢測器中,儀器進行自動校準(zhǔn)。校準(zhǔn)后按照相關(guān)操作流程放入樣品進行檢測。 實驗過程見圖1： 研究結(jié)果 1光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)痛大鼠模型的建立 參考Cecilia A. Dominguez等的方法,對經(jīng)過適應(yīng)性刺激后符合納入標(biāo)準(zhǔn)的51只大鼠進行光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)損傷造模手術(shù)。根據(jù)三叉神經(jīng)顏面部支配區(qū)機械痛閾的測評結(jié)果,判定有32只大鼠造模成功,成模率達63%。與造模前相比,三叉神經(jīng)痛模型大鼠顏面部支配區(qū)機械痛閾明顯下降,由術(shù)前的26g降低為1.60±1.74g(P0.01)。三叉神經(jīng)損傷術(shù)后10天,手術(shù)組機械痛閾為1.49±1.67g,與對照組24.17±4.49g相比神經(jīng)支配區(qū)機械痛閾明顯下降(P0.01),表明造模成功,手術(shù)組大鼠行為學(xué)改變由光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)損傷造成。 2CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng) 記錄大鼠三叉神經(jīng)支配區(qū)機械痛閾以反映藥效。結(jié)果顯示,機械痛閾在給藥前(0min時)手術(shù)各組均顯著低于對照組(P＜0.05)；給藥后(30min后),各用藥組與模型組相比均有上升,其中CQM高劑量組在3個時間點顯著升高(P＜0.05),最高達到23±7.3g,加巴噴丁組在2個時間點顯著升高(P＜0.05),最高達到20.5±9.2g；CQM高劑量組60min時顯著高于CQM低劑量組(P＜0.05)。 3CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠紋狀體細胞外液中Glu、GABA及能量代謝相關(guān)物質(zhì)水平的影響 用各組大鼠紋狀體細胞外液Glu、GABA濃度-時間曲線下面積反映觀察期間(300min內(nèi))Glu、GABA總水平的變化,可見：Glu模型組較對照組顯著升高(P＜0.05),而用藥各組顯著低于模型組(P＜0.05)；GABA模型組較對照組升高,而用藥各組低于模型組。從大鼠紋狀體細胞外液Glu、GABA濃度的變化率([給藥后濃度-給藥前濃度]/給藥前濃度×100%)可以看出：用藥各組均顯示了對紋狀體細胞外液GABA水平不同程度的抑制作用(P＜0.05)。未發(fā)現(xiàn)能量代謝相關(guān)物質(zhì)(葡萄糖、乳酸、丙酮酸、甘油及Lac/Glu)與三叉神經(jīng)痛狀態(tài)及藥物干預(yù)的顯著相關(guān)性。 結(jié)論 本實驗采用光化學(xué)誘導(dǎo)的三叉神經(jīng)痛大鼠模型,動態(tài)觀察了CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠給藥前及給藥后5h的鎮(zhèn)痛作用,并且采用腦微透析技術(shù),在動物清醒自由活動狀態(tài)下,與行為學(xué)測評時間點同步收集紋狀體細胞外液,進行高效液相分析,觀察到CQM可有效減輕三叉神經(jīng)痛模型大鼠的痛敏行為,其鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與降低紋狀體細胞外液中Glu水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CQM 光化學(xué)法 三叉神經(jīng)損傷 腦內(nèi)微透析 谷氨酸
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R745.11
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• Abstract11-15
• 中英文縮略詞表15-16
• 第一部分 文獻綜述16-27
• 綜述一 疼痛的中藥藥理研究概況16-21
• 綜述二 三叉神經(jīng)痛的發(fā)病機制及動物模型的建立21-27
• 第二部分 實驗研究27-49
• 前言27-29
• 實驗一 三叉神經(jīng)痛大鼠模型及行為學(xué)測評方法的建立29-32
• 1 研究目的29
• 2 材料29
• 3 方法29-30
• 4 結(jié)果30-32
• 5 小結(jié)32
• 實驗二 CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用32-35
• 1 研究目的32-33
• 2 材料33
• 3 方法33
• 4 結(jié)果33-35
• 5 小結(jié)35
• 實驗三 CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠腦內(nèi)紋狀體細胞外液中Glu、GABA水平的影響35-42
• 1 研究目的35
• 2 材料35
• 3 方法35-37
• 4 結(jié)果37-41
• 5 小結(jié)41-42
• 實驗四 CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠腦內(nèi)紋狀體細胞外液中能量代謝相關(guān)物質(zhì)水平的影響42-46
• 1 研究目的42
• 2 材料42
• 3 方法42-43
• 4 結(jié)果43-45
• 5 小結(jié)45-46
• 討論46-49
• 1 三叉神經(jīng)痛大鼠模型及行為學(xué)檢測方法的評價46-47
• 2 CQM鎮(zhèn)痛的機制探討47-49
• 參考文獻49-57
• 致謝57-58
• 在讀期間發(fā)表的文章58-59
• 基金項目59-60
• 課題參與情況60

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其對腦內(nèi)興奮性氨基酸遞質(zhì)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：359574