發(fā)布時間：2022-01-02 05:51

　　目的 神經干細胞具有增殖和分化能力，為神經系統(tǒng)損傷和退行性病變的治療帶來了希望，其目前的關鍵問題是神經干細胞定向分化的誘導。本研究旨在體外誘導神經干細胞定向分化為膽堿能神經元；探討神經干細胞定向分化過程中突起生長機制。 本研究分3步進行。第一，分離、培養(yǎng)新生大鼠脊髓神經干細胞，加入NGF、IGF-1、胰島素，觀察此誘導因素是否使新生鼠脊髓神經干細胞定向分化為膽堿能神經元。 第二，探討細胞骨架蛋白-β-微管蛋白（β-tubulin）在脊髓神經干細胞分化為神經元過程中的表達及意義。神經細胞發(fā)育過程中，細胞生長、遷移、軸突和樹突的發(fā)出，把大分子物質和細胞器運送到其突起的分支以及軸突與其他神經細胞建立突觸聯(lián)系等，均與細胞骨架有關。我們已知，神經元中最豐富的骨架蛋白是β微管蛋白（β-tubulin）。因此，β-tubulin表達的時空變化，可為神經干細胞的定向分化研究提供重要依據。文獻報道β-catenin可能與神經元軸突的早期生長有關。因此，結合β-catenin能更好地揭示神經元發(fā)育過程中的突起生長機制。 第三，跟蹤觀察突起生長錐中高表達的GAP-43在神經干細胞定向... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

新生大鼠脊髓神經干細胞培養(yǎng)神經球形成及其Nestin鑒定:A:神經干細胞增殖成神經球(40()x)

圖2Nes6n分化第一日的神經千細胞N.眨n陽性反應。A:神經球最邊緣的細胞呈梭形，反應弱陽性(400x)B:體積較大的畫形細胞N“tin陽性反應(悶加x)。圖3脊位神經干細飽N.石n布于細胞質中(N為細胞核，免疫電鏡結果。5以刃K)。3A2:3AI:電于毯度離的N.眨n反應機泥物分一部分核膜出現(xiàn)鋸齒狀改變(lOKx)。3B:分化第1日后，核膜似絨毛狀(15Kx)。。21.

電鏡觀察:可見電子密度高的Nestin陽性沉淀物分布于細胞質中，細胞體積小，核大，細胞質少(圖3AI)，一部分核膜出現(xiàn)短小的鋸齒狀改變(圖3A2);24k后，核旗的改變明顯，核膜邊界不清，有內凹部分，也有細小隆起，似絨毛狀，細胞質增多，細胞開始伸出突起(圖3B)了3.脊髓神經干細胞的定向分化結果加人含血清的培養(yǎng)基后，實驗組和對照組細胞都迅速貼壁，開始長出突起。實驗組細胞于剛貼壁的24小時內有細胞增殖現(xiàn)象，故�？捎^察到成堆的細胞，但兩者細胞形態(tài)無明顯差別。進行NSE免疫染色后，實驗組可見較多的NSE陽性細胞

【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞因子對神經干細胞增殖和分化的影響[J]. 張文治,蘇心,秦進喜,孔繁明,孔建國,王新平,只達石.  臨床與實驗病理學雜志. 2003(01)
[2]神經生長因子受體TrkA在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓表達差異的研究[J]. 王永忠,張志堅,劉錦波,姜平,查小英.  神經解剖學雜志. 2002(04)
[3]神經干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 呂海俠,劉勇,李敏杰,丁海燕.  西安交通大學學報(醫(yī)學版). 2002(05)
[4]整合素和細胞骨架在細胞力傳導中的作用[J]. 楊芬,李瑩輝.  航天醫(yī)學與醫(yī)學工程. 2002(04)
[5]Wnt與其他信號通路在胚胎發(fā)育過程中的crosstalk[J]. 白戈,唐珂,景乃禾.  生命的化學. 2002(04)
[6]IL-1β和胎牛血清對大鼠神經干細胞分化的影響[J]. 劉仕勇,張可成,楊輝,呂勝青.  中國組織化學與細胞化學雜志. 2000(04)
[7]心肌細胞骨架系統(tǒng)——微管的研究進展[J]. 徐峰,柏樹令.  解剖科學進展. 2000(04)
[8]脊髓神經干細胞的培養(yǎng)和鑒定[J]. 孟晉宏,Udo Bartsch,Melitta Schachner,鞠躬.  第四軍醫(yī)大學學報. 2000(08)



本文編號：3563606