本文關(guān)鍵詞：睪丸支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和遷移影響的基礎(chǔ)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs)容易獲得,在不同誘導(dǎo)分化的條件下可以分化成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等,因此BM-MSCs在再生醫(yī)學(xué)和組織工程領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cells, SCs)可以分泌多種生長因子,是一種良好的飼養(yǎng)型細(xì)胞。本論文主要通過建立transwell的共培養(yǎng)模式,研究支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和遷移的影響。具體結(jié)果如下： (1)分離、鑒定BM-MSCs,采用transwell建立BM-MSCs與睪丸支持細(xì)胞(SCs)共培養(yǎng)模型。將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和支持細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),研究發(fā)現(xiàn)支持細(xì)胞與BM-MSCs細(xì)胞接種密度比例為10：1,培養(yǎng)時(shí)間為48h時(shí),BM-MSCs細(xì)胞增殖數(shù)目最多。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)的BM-MSCs處在S期和G2/M期的細(xì)胞比例比單獨(dú)培養(yǎng)的BM-MSCs要高,而處在G0/G1期的細(xì)胞比例比單獨(dú)培養(yǎng)的BM-MSCs要少。共培養(yǎng)后,支持細(xì)胞對(duì)BM-MSCs的凋亡影響不大。 (2)研究了支持細(xì)胞分泌的四種生長因子(如表皮細(xì)胞生長因子(epithelial growth factor, EGF)類胰島素生長因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1),干細(xì)胞因子(stem cell factor, SCF),白介素-6(interleukin-6, IL-6)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明,與單獨(dú)培養(yǎng)的BM-MSCs相比,EGF、IGF-1、SCF和IL-6分別能促進(jìn)BM-MSCs增殖倍數(shù)達(dá)到對(duì)照組的1.58倍、1.29倍、1.27倍和1.16倍,其中EGF促細(xì)胞增殖效果最好。另外,通過Western blotting分析,共培養(yǎng)組的p-Akt、mdm2與對(duì)照組相比,蛋白質(zhì)表達(dá)水平提高,表明PI3K/AKT信號(hào)通路激活。添加PI3K/AKT信號(hào)通路抑制劑LY294002后,BM-MSCs增殖效果明顯降低,因此,共培養(yǎng)中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖效果明顯與PI3K/AKT信號(hào)通路激活有關(guān)。同時(shí),在Western blotting印跡分析時(shí)發(fā)現(xiàn)CyclinD1和p-CDC2蛋白質(zhì)表達(dá)水平也明顯提高,表明BM-MSCs處在S期和G2/M期的細(xì)胞比例比單獨(dú)培養(yǎng)的BM-MSCs要高,這與流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果相吻合。 (3)研究了共培養(yǎng)促BM-MSCs細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果表明：共培養(yǎng)組的細(xì)胞遷移數(shù)是單獨(dú)培養(yǎng)組的6.1倍,說明支持細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)了BM-MSCs的遷移。進(jìn)一步抗體阻斷試驗(yàn)表明：轉(zhuǎn)化生長因子p3(transforming growth factors β3, TGFβ3)和基質(zhì)細(xì)胞延伸因子-1α(stromal cell-derived factor-1α, SDF-1α)對(duì)BM-MSCs細(xì)胞遷移起重要促進(jìn)作用,推測其作用可能和MAPK信號(hào)通路有關(guān)。此外,TGFβ3和SDF-1α對(duì)BM-MSCs遷移不具有協(xié)同作用,而具有相互的抑制作用。 綜上所述,睪丸支持細(xì)胞對(duì)BM-MSCs的增殖和遷移均有促進(jìn)作用,其中至少EGF、TGFβ3等生長因子作用分別與PI3K/AKT、MARK等信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：睪丸支持細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 共培養(yǎng) 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 綜述13-21
• 1.1 支持細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)13
• 1.2 支持細(xì)胞的生物學(xué)功能13-14
• 1.3 支持細(xì)胞的研究進(jìn)展14-15
• 1.3.1 支持細(xì)胞與大鼠胰島共培養(yǎng)研究14
• 1.3.2 支持細(xì)胞的毒理功能研究14-15
• 1.3.3 支持細(xì)胞的免疫豁免功能15
• 1.3.4 支持細(xì)胞和帕金森病15
• 1.4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特征15-16
• 1.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的研究進(jìn)展16-17
• 1.6 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)蛋白質(zhì)信號(hào)通路17-18
• 1.6.1 PI3K/AKT蛋白質(zhì)信號(hào)通路概述17
• 1.6.2 PI3K/AKT蛋白質(zhì)信號(hào)通路在腫瘤中的表達(dá)17
• 1.6.3 PI3K/AKT蛋白質(zhì)信號(hào)通路與動(dòng)脈粥樣硬化17-18
• 1.6.4 PI3K/AKT蛋白質(zhì)信號(hào)通路與缺血性心臟疾病18
• 1.7 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的研究進(jìn)展18-20
• 1.7.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤遷移18-19
• 1.7.2 一氧化氮影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移19
• 1.7.3 甘丙肽促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移19
• 1.7.4 周邊相鄰的內(nèi)皮細(xì)胞和機(jī)械刺激影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移19
• 1.7.5 相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響19-20
• 1.8 研究意義20-21
• 第2章 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定21-27
• 2.1 前言21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑21-23
• 2.2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代23
• 2.2.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原鑒定23
• 2.2.4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成軟骨分化23
• 2.2.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化鑒定23-24
• 2.2.6 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨分化24
• 2.2.7 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化鑒定24
• 2.3 結(jié)果與討論24-26
• 2.3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)24-25
• 2.3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原鑒定25
• 2.3.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的多樣分化性鑒定25-26
• 2.4 小結(jié)26-27
• 第3章 與支持細(xì)胞共培養(yǎng),對(duì)BM-MSCs增殖和凋亡的影響27-38
• 3.1 前言27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑27-29
• 3.2.2 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響29
• 3.2.3 與支持細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞周期的影響29
• 3.2.4 與支持細(xì)胞共培養(yǎng)之后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原的表達(dá)29-30
• 3.2.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化鑒定30
• 3.2.6 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨分化30
• 3.2.7 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化鑒定30-31
• 3.2.8 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響31
• 3.3 結(jié)果與討論31-37
• 3.3.1 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響31-32
• 3.3.2 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞周期的影響32-33
• 3.3.3 共培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原的鑒定33-34
• 3.3.4 共培養(yǎng)之后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的多樣分化性鑒定34
• 3.3.5 Annexcin V-FITC骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡檢測34-36
• 3.3.6 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞caspase 3活性的影響36-37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第4章 支持細(xì)胞分泌的生長因子對(duì)BM-MSCs增殖的影響38-44
• 4.1 前言38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑38-39
• 4.2.2 支持細(xì)胞分泌的生長因子對(duì)BM-MSCs增殖的影響39
• 4.2.3 不同濃度的EGF對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響39-40
• 4.3 結(jié)果與討論40-42
• 4.3.1 不同種類的生長因子對(duì)BM-MSCs增殖的影響40
• 4.3.2 不同濃度的EGF對(duì)BM-MSCs增殖的影響40-42
• 4.4 小結(jié)42-44
• 第5章 PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在BM-MSCs增殖中的作用44-53
• 5.1 前言44
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法與材料44-48
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑44-46
• 5.2.2 檢測PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和細(xì)胞周期通路中的關(guān)鍵蛋白46-48
• 5.2.3 LY294002阻斷支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的作用48
• 5.3 結(jié)果與討論48-51
• 5.3.1 PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和細(xì)胞周期中的關(guān)鍵蛋白檢測結(jié)果48-49
• 5.3.2 LY294002阻斷支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的作用49-51
• 5.4 小結(jié)與討論51-53
• 第6章 支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響53-62
• 6.1 前言53
• 6.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 6.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑53-54
• 6.2.2 支持細(xì)胞對(duì)BM-MSCs遷移的影響54-55
• 6.2.3 加入TGFβ3抗體和SDF-1α抗體對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響55
• 6.2.4 不同濃度的TGFβ3對(duì)BM-MSCs遷移的影響55-56
• 6.2.5 不同濃度的SDF-1α對(duì)BM-MSCs遷移的影響56
• 6.2.6 TGFβ3和SDF-1α的聯(lián)合作用對(duì)BM-MSCs遷移的影響56
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論56-59
• 6.3.1 支持細(xì)胞促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移56-57
• 6.3.2 加入TGFβ3抗體和SDF-1α抗體對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響57-58
• 6.3.3 不同濃度的TGFβ3對(duì)BM-MSCs遷移的影響58
• 6.3.4 不同濃度的SDF-1α對(duì)BM-MSCs遷移的影響58-59
• 6.3.5 TGFβ3和SDF-1α的聯(lián)合作用對(duì)BM-MSCs遷移的影響59
• 6.4 小結(jié)59-62
• 第7章 總結(jié)與展望62-65
• 7.1 總結(jié)62-63
• 7.2 展望63-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 致謝70-71
• 碩士期間學(xué)術(shù)成果71

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 高志強(qiáng);程鵬;劉云會(huì);;表皮生長因子對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外趨化的影響[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2008年03期

2 鄭麗芳;梅元武;張小喬;張紅;楊楊;;Snail基因沉默對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子-β1促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的抑制作用[J];解剖學(xué)報(bào);2008年05期

  本文關(guān)鍵詞：睪丸支持細(xì)胞對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和遷移影響的基礎(chǔ)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：355964