目的檢測肌源性干細胞（muscle-derived stem cells，MDSCs）向類神經(jīng)細胞分化過程中Wnt/β-catenin信號途徑相關(guān)分子表達水平的變化。探討Wnt/β-catenin信號途徑在MDSCs分化過程中的調(diào)控作用。方法無菌條件下取大鼠后肢骨骼肌，將肌組織剪碎。三重酶消化肌肉組織，分離的細胞經(jīng)差速貼壁法獲取MDSCs。獲取的MDSCs于培養(yǎng)箱中采用生長培養(yǎng)基培養(yǎng)，細胞傳代培養(yǎng)至5～10代用于后續(xù)實驗。實驗分三組：對照組采用生長培養(yǎng)基單純體外培養(yǎng)MDSCs；實驗組采用含丙戊酸（valproic acid，VA）的生長培養(yǎng)基體外誘導培養(yǎng)MDSCs；抑制劑組在實驗組誘導培養(yǎng)的基礎(chǔ)上采用Dickkopf-1（DKK-1）和Frizzled蛋白家族（sFRP）抑制Wnt/β-catenin信號途徑。誘導培養(yǎng)4天后，于倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞間形態(tài)差異。誘導培養(yǎng)1天和4天后，RT-PCR檢測誘導分化過程中MDSCs內(nèi)Wnt3a mRNA表達的變化。同時采用Western blot檢測誘導分化過程中MDSCs內(nèi)GSK-3β、β-catenin蛋白含量的變化。誘導培養(yǎng)4天后采... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MDSCs第1代，細胞貼壁生長呈短桿狀或長梭形（×40）

、不同時間點三組 MDSCs 中 Wnt/β-catenin 信號途徑達水平（一）Real-time PCR 檢測 Wnt3a mRNA 表達水平接種于 24 孔板的細胞隨機分為三組后采用不同方法培養(yǎng)，分別在培養(yǎng) 4 天后進行 RT-PCR 檢測 Wnt3a mRNA 表達情況。在同一時點，實驗Wnt3a mRNA 表達水平最高，抑制劑組其次，對照組最低。三組中兩兩均具有統(tǒng)計學意義。同時實驗組和抑制劑組誘導 4 天后的表達水平高1 天后，差異有統(tǒng)計學意義。見圖 2。

圖 3-1 不同時間點三組 MDSCs 中 β-catenin 和 GSK-3β 蛋白質(zhì)印跡。圖 3-2 不同時間點三組 MDSCs 中 β-catenin 和 GSK-3β 的表達情況。注：A：對照組培養(yǎng) 1 天；B：實驗組培養(yǎng) 1 天；C：抑制劑組培養(yǎng) 1 天；D：對照組培養(yǎng) 4 天；E：實驗組培養(yǎng) 4 天；F：抑制劑組培養(yǎng) 4 天。所有數(shù)據(jù)采用表示。a,P＜ 0.05 與對照組相比；b,P＜0.05 與抑制劑組相比；c,P＜0.05 與 1 天相比。三、各組 MDSCs 的細胞形態(tài)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3558844