發(fā)布時間：2021-12-30 18:57

　　目的探索乙型腦炎疫苗株包膜蛋白（E蛋白）138位氨基酸向野毒株回復突變對其神經(jīng)毒力與神經(jīng)侵襲力的影響。方法采用重疊延伸PCR技術擴增含有K138E突變位點的DNA片段,構建乙腦疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突變的病毒感染性克隆,體外轉錄病毒RNA,電轉染BHK21細胞拯救病毒,繪制病毒生長曲線,采用蝕斑試驗與測序鑒定突變病毒,通過動物試驗評價突變病毒與疫苗株對昆明小鼠的神經(jīng)毒力和神經(jīng)侵襲力。結果酶切和測序表明K138E突變病毒感染性克隆構建成功,并通過電轉染BHK21細胞包裝得到K138E突變病毒。蝕斑試驗顯示突變病毒的蝕斑稍大于疫苗株,兩株病毒的生長曲線與神經(jīng)侵襲力無明顯不同,但突變病毒神經(jīng)毒力顯著升高。結論乙腦疫苗株E138位氨基酸回復突變后神經(jīng)毒力增強,E138位氨基酸是調(diào)控疫苗株神經(jīng)毒力的重要位點。 

【文章來源】：中國病原生物學雜志. 2019,14(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖１重疊延伸ＰＣＲ擴增Ｋ１３８Ｅ突變ＤＮＡ片段示意圖Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＫ１３８ＥｍｕｔａｎｔＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｂｙｏｖｅｒｌａｐｅｘｔｅｎｓｉｏｎＰＣＲ

析，編碼Ｅ蛋白１３８位氨基酸的堿基由原來的ＡＡＡ變?yōu)椋牵粒�，Ｋ１３８Ｅ突變病毒構建成功。１ＤＮＡ標志物（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）�?jīng)ＨｉｎｄＩＩＩ單酶切４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）經(jīng)ＢｇｌＩＩ單酶切５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）經(jīng)ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ雙酶切６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）經(jīng)ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ雙酶切７ＤＮＡ標志物（ＤＬ２０００）圖４ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變病毒感染性克�。穑粒茫危遥剩牛郑ǎ耍保常福牛┑拿盖需b定１ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＨｉｎｄＩＩＩ４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｇｌＩＩ５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ７ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）Ｆｉｇ．４ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｃｌｏｎｅｏｆＪＥＶＫ１３８Ｅｍｕｔａｎｔ圖５ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變株和疫苗株ＳＡ１４－１４－２的蝕斑比較Ｆｉｇ．５ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｑｕｅｏｆＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）ａｎｄｔｈａｔｏｆｖａｃｃｉｎｅｓｔｒａｉｎ５ＪＥＶＥ蛋白Ｋ１３８Ｅ突變病毒的生長特性ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變株培養(yǎng)２４ｈ后，病毒滴度達４．８

ａｒｋｅｒ（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＨｉｎｄＩＩＩ４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｇｌＩＩ５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ７ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）Ｆｉｇ．４ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｃｌｏｎｅｏｆＪＥＶＫ１３８Ｅｍｕｔａｎｔ圖５ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變株和疫苗株ＳＡ１４－１４－２的蝕斑比較Ｆｉｇ．５ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｑｕｅｏｆＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）ａｎｄｔｈａｔｏｆｖａｃｃｉｎｅｓｔｒａｉｎ５ＪＥＶＥ蛋白Ｋ１３８Ｅ突變病毒的生長特性ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變株培養(yǎng)２４ｈ后，病毒滴度達４．８０ｌｏｇＰＦＵ／ｍｌ，４８ｈ時達峰值為７．４５ｌｏｇＰ－ＦＵ／ｍｌ；疫苗株病毒培養(yǎng)２４ｈ時滴度為４．４１ｌｏｇＰ－ＦＵ／ｍｌ，４８ｈ時達峰值為７．３１ｌｏｇＰＦＵ／ｍｌ，差異無統(tǒng)計學意義（ｔ＝４．３０，Ｐ＝０．５３），且兩株病毒生長曲線走勢基本一致（圖６）。６ＪＥＶＥ蛋白Ｋ１３８Ｅ突變病毒的神經(jīng)毒力及神經(jīng)侵襲力測定動物試驗結果顯示，腦內(nèi)注射和皮下注射疫苗株ＳＡ１４－１４－２均不致小鼠死亡。用腦內(nèi)注射ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突變株對小鼠有致死性，且小鼠出現(xiàn)典·９７３·中國病原生物學雜志Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ

【參考文獻】：
期刊論文
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