發(fā)布時間：2021-12-22 12:55

　　目的建立一種簡單可靠的軟骨細(xì)胞體外分離和純化的方法。方法將2只幼齡新西蘭兔心臟空氣栓塞處死后,無菌操作下取得髂嵴部位的軟骨塊,修剪成1～2mm2組織塊,經(jīng)0.1%透明質(zhì)酸酶、0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型膠原蛋白酶三步法消化濾過后獲得軟骨細(xì)胞懸液,再經(jīng)臺盼藍(lán)染色檢測活細(xì)胞存活率后,接種到含10%胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)。結(jié)果取材兔髂嵴軟骨經(jīng)三步酶消化法后可獲得多量的單個軟骨細(xì)胞,具有良好的細(xì)胞活性。結(jié)論此方法是一種簡單可靠的軟骨細(xì)胞分離純化方法,可進(jìn)一步通過原代培養(yǎng)擴(kuò)增后用于軟骨或生長板損傷修復(fù)的各種基礎(chǔ)研究。目的建立一種簡便可靠的軟骨細(xì)胞體外原代培養(yǎng)的方法。方法將2只幼齡新西蘭兔心臟空氣栓塞處死后,無菌操作下取得髂嵴部位的軟骨塊,修剪成1～2mm2組織塊,經(jīng)0.1%透明質(zhì)酸酶、0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型膠原蛋白酶三步法消化濾過后獲得軟骨細(xì)胞懸液,接種到含10%FBS細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板中進(jìn)行原代培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞生長狀態(tài),軟骨細(xì)胞計數(shù)法繪制生長曲線,甲苯胺藍(lán)染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色和... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
Preface
摘要
Abstract
第一部分 兔髂嵴軟骨細(xì)胞分離及提純的實驗研究
    引言
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 兔髂嵴軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定的實驗研究
    引言
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖一
    參考文獻(xiàn)
第三部分 兔脛骨近端生長板損傷模型構(gòu)建的實驗研究
    引言
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附圖二
    參考文獻(xiàn)
綜述一 生長板形態(tài)生理學(xué)的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
綜述二 骨骺損傷的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
綜述三 軟骨組織工程學(xué)的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間以第一作者發(fā)表論文
縮略語
致謝



本文編號：3546418