發(fā)布時間：2021-12-18 18:35

　　TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligind）又叫Apo2L，是新近發(fā)現(xiàn)的TNF超家族成員，與TNF-α和FasL一樣能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。但TNF-α和FasL的細(xì)胞毒副反應(yīng)太大，無法應(yīng)用于臨床。TRAIL有較廣的抗癌譜，能誘導(dǎo)對FasL和放化療有抗性的細(xì)胞凋亡，尤其在其抗癌作用中最獨特的特征是只選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生凋亡，而對正常組織和細(xì)胞沒有顯著毒性效應(yīng)。這一特殊的選擇性使TRAIL在腫瘤治療中具有很大的應(yīng)用前景，因此，有必要對其進(jìn)行研究開發(fā)。 TRAIL分子的活性部分位于第114～281氨基酸，近來有研究報道，氨基酸95位前的序列具有抑制TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡能力，較短的重組可溶性TRAIL分子具有較高的生物學(xué)活性。胞外區(qū)41～281氨基酸片斷是全長的可溶性TRAIL分子，含有胞外區(qū)的所有遺傳信息，目前尚未見有關(guān)這一片斷的研究報道。本實驗運用基因工程的原理和方法克隆編碼人胞外區(qū)41～281片斷的cDNA，并將其插入原核表達(dá)載體pQE-80L中誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，經(jīng)純化復(fù)性后，獲得有生物學(xué)活性的重組可溶性人TRAIL

【文章來源】：重慶大學(xué)重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

eRT-PCR結(jié)果

bP2000圖2.3Fig2.3puezs汀以IL41一25，和pUC18的限制性內(nèi)切酶譜Ideniifieationofreeombin翻bye”刃matiodigestionPUC18小TRAIL;一281/Kpnl+Hindlll:2.PUC18Plasmid:3.DL2000M田火er2.3.3重組pUC18/hTRAIL41一281質(zhì)粒的cDNA序列測定對構(gòu)建的重組pUC18爪TRAIL41二81質(zhì)粒進(jìn)行插入片斷的序列測定。DNA序列圖譜的結(jié)果表明，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增出的hT凡AIL4卜281基因前soQbp以內(nèi)堿基序列與GenBank報道的完全一致。(圖2.4、圖2.5)Hindlll廠一GAAGGC以GTGCCAAGCT丁TTTT盯TACAGAAACAAAAATTGCA丁川丁AGACCAACAACAT下GGACCAT丁T盯TTGTCG丁AAAAC仁C下丁TTT仁A下GGA丁T下CCCAGGAGTTTA下TTTGC下C〔CAGTTATGTGA口CTGCTG丁AGAAATGGGTTT〔CTCAGGCANGGGGCTGG丁CATACTCAATG閃CCCCTTTT閃GGGAGTCAGCCAACTAAAAAGGCCCCGAAAAAACTGGCTTCATGGTCCATGTCTATCAAGTGCTCA80TCT盯以TTTTCCTTAAGCTCAAATATTCCCCCTT召ATAGATG以ATAGAGTCCATATTC160TATTTCTAGCACTTTT以TCAACAATATAGGGTCAGGATA人CTTGTGTATTTG下AAATATZ耳0TTCTTTGTGTTTTCTTTTATTTCCTCCTGAAATCGAAAGTATGTTTGGGAATAGATGTAG320GACCAGTTCACCAT下C〔TCAAGTGCAAG丁TGCTCAGGAATGAAT名CC以CTCCTTGATGA斗00GGCCCAGAGCCTTTTCATTCTTGGA盯TTGGAGAAGA以ATOTGTTGCT下CTTCCTCTGG鮮80ACT叮C丁GAGGACC丁CT下TCTCT以CTAGGGGAGAAATATTTTG了TGCTTTTC丁TGAACT560AGGTTCTCAAAATCATCTTTCCAACGAAGCTGACGGAAGTTTG以CTTTGACTTTGNCCA6q0CCCT丁CGTCA丁TTGGGGG丁NCCCAATAAACTGGNCATCCTTCTTT丁TNAGAAACAAAGCC720ACTTG盯C叮GGGAATCTTGGTTTCCAGCTNCGGGNAC〔CGAGCTCCNAATTC793圖2.4hTRA比4，_28，的第一次測序結(jié)果F19.2.4ThefirstresultofhTRAIL;1一25一sequencing22

puc19小TRAI玩，二:1和puc19的限制性entifioatinnofrecombinantby畔川Wm2.PUC19Plasmid;3.PUC19lbLTRAIL4，凡姐L4，~2，1質(zhì)粒的cDNA序列IL41一281片段的插入方向與puC18相定。DNA序列圖譜的結(jié)果表明，p以內(nèi)堿基序列，與報道的一致(所克隆的長723bP的hT凡似L41以81克隆編碼hT凡姐L胞外區(qū)41~281氨KPnl廠一{CCGGTACCGAGC下GAAGCAGATGCAG以以AGTACTGGGACCC以ATGACGA八GAGAGTATGAACA它仁CC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組可溶性TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[J]. 李聯(lián)運,胡建成,賓亮華,李麗霞,查紀(jì)坤,許亮國,張震,翟中和,舒紅兵.  科學(xué)通報. 2001(19)
[2]人TRAIL cDNA的真核表達(dá)和體外腫瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用[J]. 史須,黃家強(qiáng),張穎妹,宋泉聲,馬大龍.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 2001(02)
[3]LPS、rh-TNFα刺激PBL誘導(dǎo)TRAIL表達(dá)的初步研究[J]. 王梁華,朱玉平,潘衛(wèi),婁永華,陳建鶴,馮煜,焦炳華.  免疫學(xué)雜志. 1999(03)
[4]sTRAIL在大腸桿菌中的表達(dá)及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡活性的研究[J]. 朱迅,劉彥信,馬正宇,鄭德先.  科學(xué)通報. 1999(09)
[5]Annexin V聯(lián)合PI染色法定量檢測凋亡細(xì)胞[J]. 鄭駿年,謝叔良,陳家存,黃鍵.  上海免疫學(xué)雜志. 1999(01)
[6]包涵體重組蛋白的純化及復(fù)性[J]. 紀(jì)劍飛,張成剛.  沈陽藥科大學(xué)學(xué)報. 1998(04)



本文編號：3542964