慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染是嚴(yán)重威脅人類生命健康的世界性公共衛(wèi)生問題。基于現(xiàn)有抗HBV藥物的治療策略,僅能在極少部分患者中實(shí)現(xiàn)慢性乙肝的功能性治愈。發(fā)展更為有效的抗HBV藥物,需要更加透徹全面地認(rèn)識(shí)各個(gè)病毒組分和關(guān)鍵宿主因子在HBV感染和復(fù)制生命周期中發(fā)揮的功能和機(jī)制,并在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)鑒定新的治療靶點(diǎn)。支持HBV體外感染和復(fù)制的細(xì)胞模型,是研究HBV生活史的重要工具,并在治療新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和候選藥物功效評(píng)估等研究工作中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本文對(duì)支持HBV感染和復(fù)制細(xì)胞模型的新近研究進(jìn)展進(jìn)行梳理分析,并對(duì)這些模型的應(yīng)用特點(diǎn)和局限性、新近研究進(jìn)展和未來發(fā)展方向進(jìn)行系統(tǒng)闡述和討論。 

【文章來源】：微生物學(xué)報(bào). 2019,59(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：13 頁

【部分圖文】：

HBV體外感染細(xì)胞模型的生命周期模式圖

1987年，Sells團(tuán)隊(duì)和Chang團(tuán)隊(duì)分別將二倍體的HBV基因組轉(zhuǎn)入不同肝癌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了病毒的復(fù)制、病毒基因的表達(dá)以及感染性病毒顆粒的形成[57–58]，但病毒不能持續(xù)存在。HepG2.2.15細(xì)胞是在HepG2細(xì)胞中整合了雙拷貝HBV基因組的穩(wěn)定細(xì)胞株，能夠穩(wěn)定表達(dá)病毒基因相關(guān)產(chǎn)物并保證持續(xù)的HBV復(fù)制能力(表2)，已被廣泛用于HBV基礎(chǔ)生物學(xué)問題的研究，同時(shí)為早期抗病毒藥物的發(fā)展提供了工具[59–60],Dandri等通過對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞進(jìn)行活性氧或DNA修復(fù)抑制劑處理，發(fā)現(xiàn)DNA損傷可以增加HBV整合的頻率[61]。1997年，Lander等[62]利用四環(huán)素控制型CMV啟動(dòng)子構(gòu)建了HBV 1.1倍基因組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞使其成為穩(wěn)定整合HBV的HepAD38細(xì)胞株(表2)。在HepAD38細(xì)胞中，HBV pregenomic RNA的轉(zhuǎn)錄和病毒基因組復(fù)制可由四環(huán)素控制。與HepG2.2.15細(xì)胞系相比，HepAD38細(xì)胞系表達(dá)可調(diào)控，在Tet-off情況下HBV病毒的產(chǎn)量和胞內(nèi)c c c D N A的積累顯著高于HepG2.2.15[63]。利用該細(xì)胞系，Cui等發(fā)現(xiàn)TDP2(tyrosyl-DNA-phosphodiesterase 2)的缺失并不能阻斷cccDNA的形成，該發(fā)現(xiàn)提示TDP2對(duì)于cccDNA的形成或許并不是必需的[64]。HepDE19細(xì)胞(表2)也是一種在Tet調(diào)控下表達(dá)HBV的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，該細(xì)胞系是將1.1倍體的HBV基因組轉(zhuǎn)入細(xì)胞中，特殊的是整合的基因片段5′端pre-core的ATG突變成了GTG，而3′端pre-core的ATG保持完整，這種條件下HBV的E抗原(HBeAg)表達(dá)和分泌只能來源于共價(jià)閉合環(huán)狀D N A(cccDNA),HBeAg的水平與胞內(nèi)cccDNA水平是呈正相關(guān)的，從而為cccDNA靶向藥物的高通量篩選提供了一個(gè)很好的模型[65–66]。在免疫檢測(cè)中，由于HBeAg與HBcAg有154個(gè)氨基酸的同源性，多數(shù)用于HBeAg檢測(cè)的抗體均與HBcAg存在一定程度的交叉反應(yīng)，再加上naked HBV capsid的大量存在，使得在此種條件下采用商品化的HBeAg試劑檢測(cè)到的可能不是真正意義上的HBeAg，可能無法準(zhǔn)確反映胞內(nèi)cccDNA的真實(shí)水平。為解決這一問題，Cai等[67]將HA標(biāo)簽(influenza hemagglutinin,HA)插入到HBeAg的precore區(qū)，在四環(huán)素調(diào)控下進(jìn)行HBV的相關(guān)表達(dá)，以HA抗體為捕獲抗體、HBeAb為檢測(cè)抗體，獲得了不影響HBV復(fù)制且無背景反應(yīng)的cccDNA報(bào)告系統(tǒng)(HepBHAe82)(表2)。2.2 HBV基因組的傳遞載體系統(tǒng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Combination of small interfering RNA and lamivudine on inhibition of human B virus replication in HepG2.2.15 cells[J]. Gui-Qiu Li, Wei-Zhen Xu, Jing-Xia Wang, Wen-Wei Deng, Di Li, Hong-Xi Gu Department of Microbiology, Harbin Medical University, Harbin 150081, Heilongjiang Province, China Department of Histology and Embryology, Jiamusi Medical College, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China Department of Anesthesiology, Second Affiliated Hospital, Jiamusi University, Jiamusi 154002, Heilongjiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2007(16)



本文編號(hào)：3535410