本文關(guān)鍵詞：Dynamin-1敲除小鼠繁殖飼養(yǎng)、基因分型和Dynamin-1對(duì)腎上腺嗜鉻細(xì)胞分泌融合小孔的調(diào)節(jié)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Dynamin，又稱動(dòng)力蛋白或發(fā)動(dòng)蛋白，是一類96kD大小，具有鳥苷三磷酸酶(guanosine triphosphatase, GTPase)活性的蛋白質(zhì)家族。已發(fā)現(xiàn)Dynamin家族廣泛參與真核細(xì)胞泡管狀膜結(jié)構(gòu)的縮緊、閉合與脫離，并參與細(xì)胞骨架再構(gòu)建過程，參與細(xì)胞器的質(zhì)膜運(yùn)轉(zhuǎn)與回收，細(xì)胞囊泡分泌與內(nèi)吞等多重功能。 對(duì)于神經(jīng)與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，有效回收囊泡并構(gòu)成有序的循環(huán)，是維持神經(jīng)元或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)。而主要分布于神經(jīng)與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的Dynamin1介導(dǎo)多種內(nèi)吞囊泡與質(zhì)膜離斷，，使內(nèi)吞囊泡順利輸送至胞內(nèi)，以維持神經(jīng)元或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的正常生理功能。Dynamin1的突變至今被發(fā)現(xiàn)是某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病因，如：癲癇、神經(jīng)退型性疾病，并可能引起某類腎病綜合癥與腎衰。 根據(jù)國(guó)際上觀點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)室先前的研究，發(fā)現(xiàn)不論以突變或分子物質(zhì)干擾Dynamin1，不但影響細(xì)胞的內(nèi)吞功能，同時(shí)還影響分泌。耶魯大學(xué)De Camilli實(shí)驗(yàn)室為排除Dynamin1于內(nèi)吞作用研究中，使用突變或藥物而產(chǎn)生的非特異作用，于2007年構(gòu)建Dynamin1敲除小鼠(Dynamin1Knockout mice)。目前，利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物對(duì)Dynamin1于分泌中的效應(yīng)研究仍然闕如，為進(jìn)一步研究Dynamin 1于囊泡分泌中的功能，我們引進(jìn)De Camilli實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的Dynamin1敲除小鼠，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型的基因分型鑒定與照護(hù)傳代，保證遺傳背景一致的條件下改善動(dòng)物質(zhì)量，并利用電化學(xué)、電生理與電鏡方法，觀察腎上腺嗜鉻細(xì)胞Dynamin1對(duì)囊泡分泌的影響。我的研究發(fā)現(xiàn)： 1. Dynamin1KO小鼠胚胎能順利發(fā)育與產(chǎn)出，但隨Dynamin1缺失的影響顯現(xiàn)，于一周內(nèi)死亡。 2. Dynamin1KO小鼠乳鼠體重剛出生時(shí)與同窩其他基因型乳鼠無明顯差異，但隨日齡增加體重?zé)o明顯增長(zhǎng)，于24到48小時(shí)后出現(xiàn)體重輕于同窩野生型與雜合型乳鼠的現(xiàn)象。 功能分析方面我和劉斌、吳齊輝(電生理)、王昌河(電鏡)等同學(xué)的合作獲得以下初步成果： 3. Dynamin1KO三天齡乳鼠腎上腺新鮮組織切片柱狀碳纖電極電化學(xué)紀(jì)錄氧化電流較同窩野生型乳鼠增加47.24%。 4. Dynamin1KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞點(diǎn)狀碳纖電極電化學(xué)紀(jì)錄氧化電流幅度較同窩野生型乳鼠增加30%。且在半高寬不變的情況下，氧化信號(hào)峰面積積分隨電流幅度增加變化。 5. Dynamin1KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞與野生型靜息情況與恢復(fù)之后致密核心囊泡數(shù)量、直徑無明顯差異。 6. Dynamin1KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞經(jīng)電容觀察發(fā)現(xiàn)內(nèi)吞極度減慢。 綜上，我們應(yīng)用3-5天齡的Dynamin1敲除小鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Dynamin1不僅對(duì)細(xì)胞內(nèi)吞有作用，同時(shí)對(duì)細(xì)胞囊泡分泌也有貢獻(xiàn)，而后者是通過控制融合小孔實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：Dynamin1 動(dòng)物管理 敲除小鼠 嗜鉻細(xì)胞 分泌-內(nèi)吞
【學(xué)位授予單位】：北京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-13
• 第一章 引言13-44
• 1.1 細(xì)胞分泌與囊泡循環(huán)13-17
• 1.1.1 囊泡的分類14-15
• 1.1.2 囊泡的循環(huán)15-17
• 1.2 Dynamin 與胞吞作用17-35
• 1.2.1 Dynamin 的結(jié)構(gòu)與作用模式17-22
• 1.2.2 Dynamin 的分類與定位22-24
• 1.2.3 Dynamin 參與內(nèi)吞24-29
• 1.2.4 Dynamin 參與分泌29-35
• 1.3 Dynamin 1 敲除小鼠35-44
• 1.3.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物構(gòu)建策略36-38
• 1.3.2 Dynamin 1 敲除小鼠影響內(nèi)吞38-44
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法44-57
• 2.1 動(dòng)物引進(jìn)44-45
• 2.2 轉(zhuǎn)基因小鼠飼養(yǎng)與管理45-46
• 2.3 Dynamin 1 敲除小鼠基因分型46-48
• 2.4 遠(yuǎn)交動(dòng)物方法48-49
• 2.5 腎上腺新鮮組織切片方法49-50
• 2.5.1 溶液49
• 2.5.2 取材方法49-50
• 2.6 小鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞原代培養(yǎng)方法50-51
• 2.6.1 溶液50
• 2.6.2 取材方法50-51
• 2.7 電化學(xué)記錄51-53
• 2.7.1 柱狀碳纖電極紀(jì)錄51-53
• 2.7.2 微碳纖電極紀(jì)錄53
• 2.8 電鏡觀察53-54
• 2.9 電生理記錄54-55
• 2.9.1 溶液54-55
• 2.9.2 膜片鉗電容測(cè)量記錄55
• 2.10 試劑與藥品55-56
• 2.11 統(tǒng)計(jì)與分析56-57
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-78
• 3.1 改進(jìn) PCR 基因分型條件57-60
• 3.2 Dynamin 1 KO 小鼠的生長(zhǎng)曲線60-62
• 3.3 通過遠(yuǎn)交 outbreeding 改善動(dòng)物質(zhì)量62-65
• 3.4 Dynamin 1 KO 小鼠增加電化學(xué)法紀(jì)錄碳纖氧化電流65-70
• 3.4.1 柱狀碳纖電極電化學(xué)方法記錄 Dynamin 1 敲除小鼠腎上腺髓質(zhì)新鮮組織切片之去甲腎上腺素分泌的氧化電流增加 47.24%65-67
• 3.4.2 微碳纖電極電化學(xué)方法記錄 Dynamin 1 敲除小鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細(xì)胞去甲腎上腺素的分泌同新鮮切片一般增加67-70
• 3.5 電鏡觀察 Dynamin 1 KO 嗜鉻細(xì)胞的致密囊泡核心大小、型態(tài)、數(shù)量較野生型無明顯差異70-75
• 3.6 電容檢測(cè) Dynamin 1 KO 嗜鉻細(xì)胞分泌與內(nèi)吞75-78
• 第四章 討論78-82
• 1. 乳鼠體重輕于 De Camilli 實(shí)驗(yàn)室 Dynamin 1 敲除乳鼠78-79
• 2. 敲除 Dynamin 1 對(duì)腎上線髓質(zhì)部的嗜鉻細(xì)胞分泌去甲腎上腺素的影響79-80
• 3. 電鏡結(jié)果顯示 Dynamin 1 敲除小鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞中沒有出現(xiàn)”葡萄串樣” 的內(nèi)吞組分堆積現(xiàn)象80-82
• 第五章 結(jié)論82-83
• 參考文獻(xiàn)83-105
• 附錄105-106
• 已發(fā)表文章105
• 待發(fā)表文章105-106
• 致謝106-107

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本文編號(hào)：353149