目的:本實驗采用剛地弓形蟲RH強(qiáng)毒株速殖子感染BALB/c雄性小鼠,建立雄性生殖毒性的小鼠模型,采用RNA原位雜交法檢測蟲體能否侵入小鼠睪丸及附睪;利用透射電鏡觀察弓形蟲感染后小鼠睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的改變;采用單細(xì)胞凝膠電泳檢測弓形蟲感染是否導(dǎo)致小鼠睪丸細(xì)胞DNA損傷;采用分光光度法檢測弓形蟲感染對小鼠血清及睪丸組織氧自由基水平的影響,探討弓形蟲致小鼠睪丸細(xì)胞損傷的作用。方法:1.將20只BALB/c雄性小鼠隨機(jī)分為感染組（16只）和正常對照組（4只）,其中感染組小鼠腹腔注射弓形蟲速殖子2.5×103個/0.2 ml/只,正常對照組腹腔注射無菌PBS（0.01 mol/L, pH=7.4）0.2ml/只,于攻蟲第1,3,5,7天分別處死感染組小鼠4只和正常對照組1只,取睪丸及附睪,4 %多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片（7μm）,采用RNA原位雜交法檢測蟲體能否侵入小鼠睪丸及附睪組織。2.將10只BALB/c雄性小鼠隨機(jī)分2組,每組5只。正常對照組腹腔注射無菌PBS 0.2 ml/只;感染組腹腔注射純化的弓形蟲速殖子2.5×103個/0.2 ml/只。感染7天后處死各組小鼠,取睪丸組織1mm... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

生精細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的弓形蟲（紅箭頭所示400×）

0.00±0.00a 4.67±1.53a 107.33±9.07b 426.00±有統(tǒng)計學(xué)差別 P < 0.01.圖 1-1 生精細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的弓形蟲（紅箭頭所示 400×）

圖 1-3 附睪內(nèi)的弓形蟲（紅箭頭所示 400×）一種廣泛流行的疾病，其對雄性生殖系統(tǒng)的影響日漸受到人們弓形蟲急性感染小鼠睪丸直接印片中可見到弓形蟲速殖子【5, 13】只是從形態(tài)上觀察，主觀性較強(qiáng)；我們采用 RNA 原位雜交技術(shù)織中提取核酸，能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而，并可完整地保持組織和細(xì)胞的形態(tài)，對于細(xì)胞數(shù)量少且散在A 或 RNA 的研究十分方便【14】。在探針的設(shè)計上，我們選擇弓基因 SAG2 基因作為探針來源，此抗原僅存在于速殖子表面，與切關(guān)系【15】。該基因的 mRNA 有表達(dá)，表明體內(nèi)有速殖子存在侵襲力。實驗中見 mRNA 原位雜交能夠清晰顯示組織中弓形蟲程度高。采用腹腔接種弓形蟲速殖子的方法感染小鼠，最終在小鼠睪丸間質(zhì)、附睪管上皮細(xì)胞和附睪管腔的精液中檢測到速殖子，且現(xiàn)蟲體�，F(xiàn)已證明，血睪屏障是由睪丸支持細(xì)胞間的緊密連接和

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]弓形蟲RH強(qiáng)毒株對大白鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響的研究[J]. 劉濤,李凌,周光榮,熊美華.  貴州醫(yī)藥. 2007(06)
[2]弓形蟲速殖子體外感染對人精子運動影響的研究[J]. 周永華,范紅結(jié),高琪,王瑞兵.  中國血吸蟲病防治雜志. 2007(01)
[3]弓形蟲對小鼠睪丸各級生精細(xì)胞凋亡的影響[J]. 楊瑞,侯玉英,趙晉英,劉智深,張慶華,饒華祥.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2006(11)
[4]剛地弓形蟲入侵細(xì)胞過程中細(xì)胞骨架和Ca2+濃度變化[J]. 李立偉,邵浙新,嚴(yán)杰.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2006(04)
[5]弓形蟲急性感染對小鼠雄性生殖機(jī)能影響的觀察[J]. 張寶良,周永華,張平海,許永良.  中國血吸蟲病防治雜志. 2006(03)
[6]弓形蟲感染家兔精液中蟲體含量的動態(tài)變化[J]. 劉世國,劉明林,孟桂芳,高同舉.  中國人獸共患病學(xué)報. 2006(04)
[7]弓形蟲感染對大鼠、小鼠血清一氧化氮水平的影響[J]. 賴植發(fā),劉軾初,陳曉光,劉敏,周曉紅,李華.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2006(04)
[8]弓形蟲感染家兔精液中蟲體DNA檢測初報[J]. 劉世國,楊獻(xiàn)軍.  中國人獸共患病學(xué)報. 2006(03)
[9]弓形蟲感染雄性小鼠對生育影響的研究[J]. 楊連第,陳昌源,魯敏,吳秀枝,龔飛.  中國人獸共患病雜志. 2005(07)
[10]男性不育精液中NO的含量與生殖細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 楊麥貴,楊陽,黃萍,郝曉柯,鄭善鑾,張竹映,饒國洲.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2005(04)



本文編號：3510637