目的原核表達(dá)弓形蟲TgPRF蛋白,制備多克隆抗體并評價其作為內(nèi)參抗體的可行性。方法以剛地弓形蟲RH株速殖子cDNA為模板,PCR擴增TgPRF編碼基因,克隆至pGEX-4T-1載體,轉(zhuǎn)化至大腸埃希氏菌（Escherichia coli）BL21。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,SDS-PAGE分析重組蛋白表達(dá)情況。利用GST標(biāo)簽親和層析法純化重組蛋白。以純化后蛋白為抗原免疫新西蘭大白兔,制備抗TgPRF多克隆抗體。收集弓形蟲RH株速殖子,以制備的多克隆抗體為一抗,Western blotting檢測抗體特異性及效價。收集ATc調(diào)控下不同時間點的弓形蟲iKO-Ty-TgAPH蟲株速殖子進(jìn)行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗體為一抗,檢測TgAPH和TgPRF表達(dá)量的變化。結(jié)果 SDS-PAGE顯示:TgPRF在誘導(dǎo)4 h后表達(dá)量趨于飽和,相對分子量為52 ku,且呈可溶性表達(dá)。弓形蟲RH株速殖子總蛋白進(jìn)行的Western blotting顯示:抗TgPRF多克隆抗體可識別內(nèi)源性的TgPRF,且該多克隆抗體稀釋至1∶10 000時仍可見明顯條帶;iKO-TyTgAPH蟲株速殖... 

【文章來源】：中國熱帶醫(yī)學(xué). 2019,19(07)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞、弓形蟲株及實驗動物
        1.1.2 質(zhì)粒和菌株
        1.1.3 試劑
    1.2 方法
        1.2.1 弓形蟲速殖子的體外培養(yǎng)
        1.2.2 TgPRF基因克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 GST-TgPRF重組蛋白的表達(dá)與純化
        1.2.4 TgPRF多克隆抗體的制備
        1.2.5 多克隆抗體的特異性與效價檢測
        1.2.6 TgPRF作為內(nèi)參的Western blotting實驗
2 結(jié)果
    2.1 GST-TgPRF重組蛋白的表達(dá)分析
    2.2 TgPRF多克隆抗體的特異性檢測
    2.3 TgPRF作為內(nèi)參的可行性分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]剛地弓形蟲TgPH1蛋白的重組表達(dá)及其與磷脂酰肌醇結(jié)合性的鑒定[J]. 賈永根,閆愛霞,黃敏君.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2019(03)
[2]頂復(fù)門原蟲運動、入侵和逸出相關(guān)分子機制研究進(jìn)展[J]. 閆愛霞,鄒洋,李晶晶,李縝,賈永根,谷俊朝.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2018(09)
[3]Profilin在弓形蟲侵入宿主細(xì)胞及誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中作用的研究進(jìn)展[J]. 熊乙丁,楊瑞,岳續(xù)鵬,寥業(yè).  中國人獸共患病學(xué)報. 2017(12)



本文編號：3507236