本文關(guān)鍵詞：Cideb在腎小管上皮脂肪代謝中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的DFF45樣效應(yīng)因子b蛋白（cell death-inducing DFF45-like effector,Cideb）是20世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)的CIDE家族的重要成員，盡管最初被認(rèn)為與細(xì)胞凋亡相關(guān)，但后來的研究顯示出Cideb是一個重要的脂滴表面蛋白，其定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴。載脂蛋白B（apolipoprotein B, apoB）是一種重要的載脂蛋白分子，是乳糜微粒（chylomicron，CM）和VLDL的關(guān)鍵分子。進一步的研究結(jié)果顯示Cideb能夠通過與apoB相互作用，促進極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）的脂化過程，進而影響中性脂肪的分泌，同時Cideb參與了肝臟的脂肪代謝過程。然而，很多研究報道了Cideb表達于腎臟，且水平較高，但是其在腎臟的具體作用尚不明確。我們推測Cideb可能參與了腎小管的脂肪重吸收過程，但其具體作用以及可能的機制尚需深入研究。 腎臟是一個機體物質(zhì)代謝過程中的重要器官，并且很多腎臟疾病會出現(xiàn)脂質(zhì)代謝的異常。比如腎病綜合征、糖尿病腎病、尿毒癥及腎移植術(shù)后。其中，以腎病綜合征（nephrotic syndrome，NS）時的高脂血癥最為突出。膜性腎病時，腎小球通透性增加，從而加重了腎小管重吸收的負(fù)擔(dān)，因此可作為研究腎小管重吸收功能的重要模型。本課題以Cideb敲除小鼠模型，確定Cideb缺失對腎臟脂肪含量的影響；通過膜性腎病小鼠模型和人類膜性腎病標(biāo)本，檢測Cideb表達水平在膜性腎病中的變化；用過表達和沉默Cideb的細(xì)胞模型，確定Cideb對腎小管上皮細(xì)胞脂肪代謝過程的影響。本研究不僅有助于闡明Cideb在腎臟中的作用，同時對了解腎臟脂肪代謝過程也具有重要意義。 研究目的： 1）分析Cideb在腎臟中的表達水平以及分布規(guī)律，并確定Cideb敲除小鼠腎臟中脂肪含量的變化。2）檢測膜性腎病腎穿刺標(biāo)本和膜性腎病小鼠腎小管上皮細(xì)胞中Cideb表達水平，確定Cideb表達水平與腎小管重吸收功能之間的關(guān)系。3）運用過表達和沉默Cideb的腎小管上皮細(xì)胞，確定Cideb在腎小管上皮脂肪重吸收和分泌中的作用，探討Cideb對腎小管上皮脂肪代謝的影響。 研究方法： 1）運用免疫組化技術(shù)，確定Cideb在腎臟中的表達水平和細(xì)胞分布情況，以及與載脂蛋白apoB在腎小管中的表達情況； 2）通過Oil Red O染色和甘油三酯（triglyceride, TG）定量分析研究Cideb敲除小鼠腎臟內(nèi)脂肪的變化，確定Cideb缺失腎小管上皮細(xì)胞脂肪含量的影響； 3）尾靜脈注射C-BSA建立膜性腎病的動物模型，通過血尿生化分析和各種組織學(xué)方法進行鑒定。運用免疫組化方法分析，腎病綜合征小鼠腎小管上皮中Cideb和apoB的表達水平，并通過Oil Red O染色確定腎臟的脂肪含量變化； 4）收集膜性腎病高脂血癥患者的腎穿刺標(biāo)本，通過免疫組化分析腎小管上皮Cideb、apoB的表達水平； 5）通過不同濃度的棕櫚酸刺激人類近端腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞，通過Western blot、Bodipy493/503染色、TG定量分析等方法確定Cideb表達水平與腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量、脂肪含量的關(guān)系； 6）用攜帶Cideb和Cideb siRNA的腺病毒感染HK-2細(xì)胞，建立Cideb過表達和沉默的HK-2細(xì)胞，通過Western blot、Bodipy493/503染色、TG定量分析等方法確定Cideb表達水平對腎小管上皮脂肪含量的影響； 7）運用Transwell培養(yǎng)系統(tǒng)建立腎小管上皮重吸收體外模型，運用3H標(biāo)記脂肪酸，測定Cideb對脂肪吸收的影響。 研究結(jié)果： 1）Cideb在腎小管上皮細(xì)胞中表達，且Cideb敲除小鼠腎臟脂肪含量增高。 通過透射電鏡觀察到在小鼠的腎小管上皮細(xì)胞中有脂蛋白樣的顆粒存在；免疫組化染色結(jié)果顯示Cideb主要分布在腎小管上皮細(xì)胞中，且在近端小管中表達水平最高，而腎小球不表達Cideb。apoB在腎臟的表達情況與之類似。Oil Red O染色和TG定量分析發(fā)現(xiàn)Cideb缺失的小鼠腎臟中脂肪含量明顯增加，結(jié)果提示Cideb參與了腎臟的脂肪代謝過程。 2）在膜性腎病小鼠模型和膜性腎病患者中，腎小管中Cideb的表達水平明顯升高。 在膜性腎病時，腎小球的基底膜發(fā)生破壞，造成腎小球通透性明顯增加，從而增強了腎小管的重吸收功能，因此膜性腎病也成為研究腎小管代謝的重要模型。在本研究中，我們通過尾靜脈建立的小鼠模型和人膜性腎病的穿刺標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)Cideb和apoB的表達均升高。這些結(jié)果表明，在腎小管重吸收功能增加時，腎小管上皮細(xì)胞中Cideb表達水平增加，且與apoB的升高一致，這提示Cideb與腎小管的重吸收功能有關(guān)，且很可能參與了腎小管上皮細(xì)胞脂蛋白的代謝過程。 3）Cideb能夠抑制腎小管上皮細(xì)胞中脂肪儲積，并促進脂肪的分泌過程。 用不同濃度棕櫚酸促進腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)脂肪的儲積，結(jié)果顯示能夠提高細(xì)胞內(nèi)Cideb表達水平。同時，運用腺病毒在HK-2細(xì)胞內(nèi)過表達Cideb，用顯示脂滴的Bodipy493/503染色，結(jié)果顯示Cideb過表達能夠降低細(xì)胞內(nèi)TG的含量，減少胞漿內(nèi)脂滴數(shù)量。然而，沉默Cideb可以顯著提高細(xì)胞內(nèi)TG的含量，增加細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量增加。進一步，運用Transwell培養(yǎng)系統(tǒng)建立腎小管上皮重吸收體外模型，3H標(biāo)記的脂肪酸測定腎小管上皮分泌脂蛋白的情況。結(jié)果顯示，過表達Cideb能夠抑制HK-2細(xì)胞內(nèi)脂肪儲積速度，促進HK-2細(xì)胞脂肪的分泌速度；抑制Cideb能夠造成細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)儲積，并抑制HK-2細(xì)胞的分泌過程。結(jié)果提示，Cideb能夠促進腎小管上皮脂肪的分泌過程。 結(jié)論： 本研究首先確定了Cideb主要表達于腎小管上皮細(xì)胞，且在腎近曲小管上皮細(xì)胞中表達水平最高，且與apoB表達水平和腎小管重吸收功能一致；而Cideb缺失小鼠腎小管上皮細(xì)胞中脂肪含量明顯增加。由于膜性腎病時腎小球通透性明顯增加，因此我們在建立膜性腎病小鼠模型基礎(chǔ)上，加上膜性腎病患者的穿刺標(biāo)本，分析Cideb表達水平與膜性腎病之間的關(guān)系，，結(jié)果顯示Cideb在膜性腎病的腎小管上皮細(xì)胞中表達水平明顯升高，并與apoB升高一致。為了進一步確定Cideb在腎小管上皮細(xì)胞中的具體作用和機制，我們運用過表達和沉默Cideb的腺病毒感染HK-2細(xì)胞，結(jié)果顯示過表達Cideb能夠抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)儲積，并促進腎小管上皮細(xì)胞脂質(zhì)的分泌；相反沉默Cideb能夠造成細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的儲積，而降低細(xì)胞TG的分泌速度。 綜上所述，本研究首次確定了Cideb主要表達于腎小管上皮細(xì)胞，并可能與腎小管上皮的重吸收功能有關(guān)。作為一個脂滴表面蛋白，Cideb能夠促進腎小管上皮細(xì)胞TG的分泌，而抑制脂質(zhì)的儲積。我們推測Cideb在腎小管上皮細(xì)胞中發(fā)揮著與肝臟類似的功能，即參與了脂蛋白的形成和分泌過程，但具體機制有待深入研究。
【關(guān)鍵詞】：腎臟 脂蛋白 Cideb apoB 膜性腎病 分泌
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 縮略語表4-7
• 中文摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 前言16-18
• 文獻回顧18-29
• 第一部分 Cideb 敲除小鼠腎臟內(nèi)脂肪的變化29-39
• 0 引言29
• 1 材料29-31
• 2 方法31-33
• 3 結(jié)果33-36
• 4 討論36-39
• 第二部分 Cideb 在膜性腎病的腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)表達變化39-49
• 0 引言39
• 1 材料39-41
• 2 方法41-43
• 3 結(jié)果43-47
• 4 討論47-49
• 第三部分 Cideb 對腎小管上皮細(xì)胞脂肪含量及甘油三酯分泌的影響49-59
• 0 引言49
• 1 材料49-51
• 2 方法51-53
• 3 結(jié)果53-57
• 4 討論57-59
• 小結(jié)59-60
• 參考文獻60-65
• 個人簡歷和研究成果65-66
• 致謝66

【共引文獻】

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2 王t

本文編號：349875