目的：借助酵母菌的表達(dá)和免疫特性，利用基因工程技術(shù)構(gòu)建表達(dá)乙型肝炎表面抗原及表面抗原與截短的熱休克蛋白70的重組酵母菌，然后以整體活菌形式免疫BALB/C小鼠，作為一種針對HBV的治療性疫苗，探索一種可有效活化機(jī)體抗HBV細(xì)胞免疫的免疫策略。方法：以基因工程技術(shù)構(gòu)建內(nèi)含HBsAg的重組啤酒酵母和畢赤酵母以及 HSP70（1-370）-HBsAg的重組畢赤酵母,以完整活菌形式于BALB/C小鼠皮下進(jìn)行4次免疫后,用ELISA法檢測其對乙型肝炎表面抗原的體液免疫及小鼠脾細(xì)胞與HBsAg共孵育后細(xì)胞因子的分泌情況；以[3H]摻入法測定小鼠脾細(xì)胞對HBsAg特異性的細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果：在兩種重組酵母組中都成功誘導(dǎo)了小鼠體內(nèi)乙型肝炎表面抗體的產(chǎn)生，顯示乙型肝炎表面抗原抗原性并未受到影響。在重組啤酒酵母組中，通過[3H]摻入法可見HBsAg特異性的細(xì)胞增殖反應(yīng)；在重組畢赤酵母組中，細(xì)胞因子檢測結(jié)果顯示重組畢赤酵母活菌可以誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞分泌更多的IL-2，但對IL-4、γ-IFN的分泌無影響。結(jié)論：整體重組酵母活菌具有疫苗特性,可在小鼠體內(nèi)激發(fā)體液免疫及一定程度的細(xì)胞免疫反應(yīng)。重組酵母活菌用于激發(fā)機(jī)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

-8ELISA法分別檢測酵母菌體裂解液和培養(yǎng)上清中HBsAg的表達(dá)結(jié)果

可穩(wěn)定在這一水平（圖 1-1-10）。以純化 HBsAg 蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以推算出分別在誘導(dǎo) 18 小時和 30 小時的情況下，HBsAg 的表達(dá)量分別約為0.013ug/ml 和 0.006ug/ml（圖 1-1-11）。Fig 1-1-8 ELISA result :HBsAg in supernatant of lysate and culture of recombinant yeast圖 1-1-8 ELISA 法分別檢測酵母菌體裂解液和培養(yǎng)上清中 HBsAg 的表達(dá)結(jié)果

重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文細(xì)胞計數(shù)后按 1×106/孔加入 96 孔圓底培養(yǎng)板。按加入刺激用 HBsAg 的量分為 4 組（總體積 200ul）：，即 0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml。于 37℃，5%CO2孵育 60 小時，然后于每孔加入[3H]TdR（37kBq/孔），繼續(xù)培養(yǎng) 12 小時，以細(xì)胞收集器收集細(xì)胞于玻璃纖維濾紙上，待干后，以液體閃爍計數(shù)儀測定 CPM 值。4、 統(tǒng)計學(xué)處理：采用 Microsoft Excel2000 中的 TTEST 函數(shù)進(jìn)行異方差雙樣本檢驗(yàn)。三． 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、 整體基因重組啤酒酵母的培養(yǎng)誘導(dǎo)：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3464228