目的:Toll樣受體（TLRs）不僅是參與天然免疫反應(yīng)的重要受體,也是連接天然免疫和特異性免疫的橋梁。最新研究提示,TLRs及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能參與抗磷脂綜合征（APS）的病理機(jī)制。本論文重點(diǎn)探討TLR4在抗磷脂抗體/抗原復(fù)合物（anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物）誘導(dǎo)單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞表達(dá)組織因子（tissue factor,TF）中的作用;以及TLR4的作用是否依賴細(xì)胞表面另一分子—膜聯(lián)蛋白Ⅱ（Annexin A2,ANX2）。方法:①利用熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測anti-β2GPI/β2GPI誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞TF mRNA的表達(dá),采用試劑盒檢測細(xì)胞TF活性。②利用自制的β2GPI膠聯(lián)親和層析柱（β2GPI-Affi-Gel）分析β2GPI與THP-1細(xì)胞表面相應(yīng)受體結(jié)合情況。③Real-time PCR及Western蛋白印跡檢測anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)TLR4、MyD88（髓樣分化因子88）、MD-2（髓樣分化蛋白-2）情況。④觀察TLR4途徑抑制物—紫杉醇是否干預(yù)anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物對細(xì)胞的作用。... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 TLRs的發(fā)現(xiàn)
    1.2 TLRs的結(jié)構(gòu)與分布
    1.3 TLRs的配體
    1.4 TLRs的激活及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
        1.4.1 MyD88依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.4.2 MyD88非依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
    1.5 TLRs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控機(jī)制
    1.6 TLR家族成員在抗磷脂綜合征病理機(jī)制形成中的作用
        1.6.1 抗磷脂綜合征
        1.6.2 TLR4與抗磷脂綜合征
        1.6.3 TLR2、TLR7和TLR8與抗磷脂綜合征
    1.7 TLRs與其他疾病
        1.7.1 TLRs與系統(tǒng)性紅斑狼瘡
        1.7.2 TLRs與艾滋病(AIDS)
    1.8 結(jié)語
第二章 研究目的、方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計方案及意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計方案
    2.4 研究意義
第三章 TLR4及相關(guān)信號分子MyD88和MD-2在anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF中的作用
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 其它試劑
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 β2GPI親和柱的制備
        3.2.3 β2GPI與THP-1細(xì)胞相應(yīng)受體結(jié)合分析
        3.2.4 細(xì)胞總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄
        3.2.5 Real-time PCR分析
        3.2.6 細(xì)胞總蛋白的提取及Western蛋白印跡
        3.2.7 TF活性檢測
        3.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 Anti-β2GPI/β2GPI誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF mRNA及活性
        3.3.2 β2GPI與THP-1細(xì)胞相應(yīng)受體結(jié)合
        3.2.3 Anti-β2GPI/β2GPI作用于THP-1細(xì)胞不同時間對TLR4、MyD88、MD-2表達(dá)的影響
        3.3.4 不同刺激物對THP-1細(xì)胞TLR4、MyD88及MD-2表達(dá)的影響
        3.3.5 不同濃度紫杉醇對anti-β2GPI/β2GPI誘導(dǎo)TLR4、MyD88及MD-2蛋白表達(dá)的影響
        3.3.6 1μmol/L紫杉醇對不同刺激物刺激THP-1細(xì)胞TLR4、MyD88、MD-2的表達(dá)的影響
        3.3.7 1μmol/L紫杉醇對不同刺激物刺激THP-1細(xì)胞TF表達(dá)的影響
    3.4 討論
第四章 TLR4是否依賴ANX2在anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF中起作用?
    4.1 材料
        4.1.1 主要試劑和儀器
    4.2 方法
        4.2.1 單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.2 病毒感染
        4.2.3 干擾效率內(nèi)源驗(yàn)證
        4.2.4 TLR4、MyD88、MD-2基因和蛋白水平達(dá)及TF活性的檢測
        4.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 細(xì)胞感染病毒后熒光的觀察
        4.3.2 ANX2干擾效率驗(yàn)證
        4.3.3 ANX2 RNAi對anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TLR4、MyD88及MD-2 mRNA水平的影響
        4.3.4 ANX2 RNAi對anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TLR4、MyD88及MD-2蛋白水平的影響
        4.3.5 Anti-β2GPI/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)ANX2 RNAi的THP-1細(xì)胞TF mRNA表達(dá)及TF活性
    4.4 討論
第五章 主要結(jié)論及展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章、參加學(xué)術(shù)會議及參加或主持的課題


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]APS IgG通過非Fc受體途徑誘導(dǎo)血液單核細(xì)胞表達(dá)TF活性[J]. 周紅,谷俊俠,許文榮.  中國免疫學(xué)雜志. 2003(08)



本文編號：3458064