目的探討肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae,Mp）脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白（lipid-associated membrane protein,LAMPs）對人單核細(xì)胞表達(dá)血紅素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的影響,并探討可能的調(diào)控機(jī)制。方法體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,用不同濃度的LAMPs作用后,分別采用realtime-PCR和Western blot檢測HO-1mRNA和蛋白的表達(dá)。同時采用不同濃度的放線菌素D（ActD）和放線菌酮（CHX）預(yù)處理細(xì)胞,觀察其對HO-1表達(dá)的影響,以證實(shí)HO-1的表達(dá)是否通過轉(zhuǎn)錄和翻譯水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)檢測Nrf2的核轉(zhuǎn)位、Western blot檢測Akt的磷酸化情況;同時采用PI3K抑制劑LY294002處理細(xì)胞,觀察其對LAMPs誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位及HO-1表達(dá)的影響;最后采用siRNA干擾Nrf2表達(dá),以證實(shí)Nrf2是否參與調(diào)控HO-1表達(dá)。結(jié)果 （1）0⁵μg/mL LAMPs能以劑量依賴性方式誘導(dǎo)THP-1表達(dá)HO-1mRNA和蛋白;（2）5μg/... 

【文章來源】：中國人獸共患病學(xué)報. 2015,31(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

圖１不同濃度ＬＡＭＰｓ對ＬＤＨ漏出的影響Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ

ＴＨＰ－１細(xì)胞ＨＯ－１ｍＲＮＡ表達(dá)的影響Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＨＯ－１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．３ＬＡＭＰｓ誘導(dǎo)ＴＨＰ－１細(xì)胞表達(dá)ＨＯ－１蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ顯示，不同濃度ＬＡＭＰｓ作用ＴＨＰ－１細(xì)胞１６ｈ后，可明顯誘導(dǎo)ＨＯ－１蛋白表達(dá)，其含量與ＬＡＭＰｓ的濃度呈一定的劑量依賴性（圖３）。圖３不同濃度ＬＡＭＰｓ對ＨＯ－１蛋白表達(dá)的影響Ｆｉｇ．３ＩｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＡＭＰｓ２．４ＬＡＭＰｓ經(jīng)持續(xù)的轉(zhuǎn)錄和翻譯誘導(dǎo)ＨＯ－１表達(dá)ＴＨＰ－１細(xì)胞經(jīng)不同濃度的放線菌素（ＡｃｔＤ，轉(zhuǎn)錄抑制劑）和放線菌酮（ＣＨＸ，翻譯水平抑制劑）作用后，可顯著抑制ＬＡＭＰｓ誘導(dǎo)ＴＨＰ－１細(xì)胞表達(dá)ＨＯ－１（圖４Ａ、Ｂ）。２．５ＬＡＭＰｓ誘導(dǎo)ＴＨＰ－１細(xì)胞表達(dá)與ＰＩ３Ｋ有關(guān)ＬＡＭＰｓ作用１５ｍｉｎ后Ａｋｔ磷酸化到達(dá)高峰，隨后隨之降低。而總Ａｋｔ在所有處理組中保持恒定（圖５Ａ）。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制劑ＬＹ２９４００２預(yù)處理ＴＨＰ－１細(xì)胞后，可顯著降低ＬＡＭＰｓ誘導(dǎo)ＨＯ－１的表達(dá)（圖５Ｂ）。圖４放線菌素Ｄ和放線菌酮對ＴＨＰ－１細(xì)胞ＨＯ－１表達(dá)的影響Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＡｃ

４期劉艷等：肺炎支原體ＬＡＭＰｓ經(jīng)ＰＩ３Ｋ／Ｎｒｆ２誘導(dǎo)人單核細(xì)胞表達(dá)ＨＯ－１圖５ＬＡＭＰｓ對ＴＨＰ－１細(xì)胞Ａｋｔ磷酸化的影響Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｏｆＡｋｔｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．６ＬＡＭＰｓ增強(qiáng)ＴＨＰ－１細(xì)胞Ｎｒｆ２ＤＮＡ結(jié)合活性ＬＡＭＰｓ處理３０ｍｉｎ尚不能檢測出Ｎｒｆ２ＤＮＡ結(jié)合活性的變化，６０ｍｉｎ后開始增強(qiáng)，１２０ｍｉｎ后達(dá)到高峰。未標(biāo)記Ｎｒｆ２探針可使ＤＮＡ－蛋白結(jié)合形成的滯后條帶消失，而ＮＦ－κＢ探針對其無明顯影響。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制劑ＬＹ２９４００２處理后，Ｎｒｆ２ＤＮＡ結(jié)合活性顯著降低。見圖６。２．７干擾Ｎｒｆ２表達(dá)抑制ＬＡＭＰｓ誘導(dǎo)ＴＨＰ－１細(xì)胞表達(dá)ＨＯ－１采用ｓｉＲＮＡ干擾Ｎｒｆ２表達(dá)后，再用ＬＡＭＰｓ刺激ＴＨＰ－１細(xì)胞１６ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ結(jié)果顯示，ＨＯ－１的表達(dá)顯著降低（圖７）。圖６ＬＡＭＰｓ經(jīng)ＰＩ３Ｋ增強(qiáng)Ｎｒｆ２ＤＮＡ結(jié)合活性Ｆｉｇ．６ＬＡＭＰｓｃｏｕｌｄｒａｉｓｅｔｈｅＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮｒｆ２ｖｉａＰＩ３Ｋｐａｔｈｗａｙｓ圖７ｓｉＲＮＡ干擾Ｎｒｆ２表達(dá)后對ＨＯ－１表達(dá)的影響Ｆｉｇ．７ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＮｒｆ２ｂｙｓｉＲＮＡ３討論機(jī)體感染支原體后，單核巨噬細(xì)胞通過其表面的ＴＬＲ識別，并經(jīng)ＭｙＤ８８／ＴＲＡＦ６／ＮＦ－κＢ信號通路誘

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞氧化應(yīng)激時Nrf2／ARE信號通路對抗氧化基因表達(dá)的調(diào)控:與動脈粥樣硬化和先兆子癇的關(guān)系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow.  生理學(xué)報. 2007(02)
[2]Interactions between mycoplasma lipid-associated membrane proteins and the host cells[J]. YOU Xiao-xing, ZENG Yan-hua, WU Yi-mou (Institute of Pathogenic Biology, School of Medicine, Nanhua University, Hengyang 421001, China).  Journal of Zhejiang University Science. 2006(05)
[3]Activation of nuclear factor κB and induction of inducible nitric oxide synthase by lipid-associated membrane proteins isolated from Mycoplasma penetrans[J]. 曾焱華,吳移謀,張文波,余敏君,朱翠明,譚立志.  Chinese Medical Journal. 2004(07)



本文編號：3450241