目的探查吳茱萸湯減輕福爾馬林誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛模型小鼠的疼痛作用機制。方法 40只C57BL/6雄性小鼠,隨機分為正常組、模型組、吳茱萸湯低劑量組、吳茱萸湯中劑量組和吳茱萸湯高劑量組。吳茱萸湯各劑量組分別灌以吳茱萸湯水煎液[3.12、6.24、12.48 g/（kg·d）],共4天。第4天,吳茱萸湯各劑量組灌胃后2小時,以瞬時感受器電位錨蛋白-1（transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1）激動劑10%福爾馬林,10μL/只灌腸,在福爾馬林誘導(dǎo)的急性內(nèi)臟痛模型小鼠上,觀察吳茱萸湯干預(yù)后的疼痛行為變化和運用免疫組化染色及免疫印跡法檢測吳茱萸湯干預(yù)后的小鼠結(jié)腸組織中TRPA1的表達(dá)變化。結(jié)果 HE染色顯示吳茱萸湯各劑量組干預(yù)均可使小鼠結(jié)腸中肌層、黏膜層壞死減輕,炎性浸潤減少,受損的隱窩修復(fù);行為學(xué)實驗觀察吳茱萸湯高、中、低劑量預(yù)處理4天后與模型組對比,小鼠疼痛行為頻次明顯降低（P<0.05）;免疫組化實驗,吳茱萸湯高、中、低劑量預(yù)處理后,與模型組對比,肌層的TRPA1陽性表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05）;蛋白條帶密度分析提示,吳茱萸湯高、中劑... 

【文章來源】：環(huán)球中醫(yī)藥. 2019,12(08)

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【部分圖文】：

各組小鼠結(jié)腸炎癥對比(HE×100)2．2吳茱萸湯減少福爾馬林內(nèi)臟痛模型小鼠疼痛行為注:A:正常組;B:

August2019，Vol.12，No.8表2免疫組化染色顯示各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比(x±s，n=8)組別劑量(g/kg)IODofTＲPA1正常組－72．50±15．57模型組－153．82±17．60a吳茱萸湯低劑量組3．12136．48±19．17b吳茱萸湯中劑量組6．2498．49±15．24b吳茱萸湯高劑量組12．4886．85±11．07b注:與正常組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05。注:A:正常組;B:模型組;C:吳茱萸湯低劑量組;D:吳茱萸湯中劑量組;E:吳茱萸湯高劑量組。圖2各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比(免疫組化×100)2．4吳茱萸湯下調(diào)福爾馬林內(nèi)臟痛小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)如圖3、表3所示，蛋白條帶密度分析提示，與正常組相比，福爾馬林模型組小鼠結(jié)腸組織中TＲ-PA1表達(dá)明顯高于正常組(P＜0．05)。吳茱萸湯高、中劑量預(yù)處理后能使小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)下調(diào)，與模型組差異明顯(P＜0．05)。表3各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比(x±s，n=6)組別劑量(g/kg)TＲPA1/β-tubulin正常組－0．15±0．08模型組－0．53±0．10a吳茱萸湯低劑量組3．120．45±0．06吳茱萸湯中劑量組6．240．33±0．11b吳茱萸湯高劑量組12．480．36±0．06b注:與正常組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05。圖3WB顯示各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比3討論在這個實驗中明確了吳茱萸湯可以抑制福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛。福爾馬林疼痛模型廣泛用于評估動物實驗中化合物的鎮(zhèn)痛作用，其中包括福爾馬林結(jié)腸給藥造模誘導(dǎo)的內(nèi)臟炎性疼痛模型［10-11］。結(jié)腸內(nèi)施用福爾

櫓??TＲ-PA1表達(dá)明顯高于正常組(P＜0．05)。吳茱萸湯高、中劑量預(yù)處理后能使小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)下調(diào)，與模型組差異明顯(P＜0．05)。表3各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比(x±s，n=6)組別劑量(g/kg)TＲPA1/β-tubulin正常組－0．15±0．08模型組－0．53±0．10a吳茱萸湯低劑量組3．120．45±0．06吳茱萸湯中劑量組6．240．33±0．11b吳茱萸湯高劑量組12．480．36±0．06b注:與正常組比較，aP＜0．05;與模型組比較，bP＜0．05。圖3WB顯示各組小鼠結(jié)腸組織中TＲPA1表達(dá)對比3討論在這個實驗中明確了吳茱萸湯可以抑制福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛。福爾馬林疼痛模型廣泛用于評估動物實驗中化合物的鎮(zhèn)痛作用，其中包括福爾馬林結(jié)腸給藥造模誘導(dǎo)的內(nèi)臟炎性疼痛模型［10-11］。結(jié)腸內(nèi)施用福爾馬林引起的疼痛行為在給藥后30分鐘達(dá)到最大值再逐漸減少。此外，疼痛評分也與脊髓中廣動力學(xué)性(widedynamicrange，WDＲ)神經(jīng)元放電率的變化一致，在30分鐘同樣達(dá)到峰值并逐漸降低，直至90分鐘后消失［10-12］。福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛是由熱敏通道TＲPA1介導(dǎo)的。TＲPA1在內(nèi)臟傳入神經(jīng)元中表達(dá)，參與內(nèi)臟的炎癥反應(yīng)和超敏反應(yīng)，TＲPA1特異性阻滯劑HC-030031可以抑制這種疼痛行為［13］。TＲPA1屬于非選擇性陽離子通道的瞬時受體電位(transientreceptorpotential，TＲP)家族中的一員，是典型的溫度敏感通道，TＲPA1在17°C左右溫度被活化，接近人類有害寒冷的閾值(15°C)。中藥白芥子、肉桂、白芷和大蒜［14-16］中的活性成分可以激活TＲP

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于熱敏通道TRPV1探討吳茱萸湯對醋酸內(nèi)臟痛模型小鼠的止痛作用[J]. 劉珍洪,高琳,汪文來,趙紅霞,高蔚,安致君,郭蓉,吳丹桐,楊楨.  成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2017(03)
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[3]熱敏通道:“寒者熱之,熱者寒之”的細(xì)胞和分子生物學(xué)意義[J]. 楊楨,高琳,趙紅霞,蘆沖,李冀.  中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志. 2014(10)
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[5]附子理中湯合吳茱萸湯加減治療小兒慢性泄瀉1例[J]. 宮鳳英,朱淑然,文毓聲,黃榮鋁,王中華,呂英.  河南中醫(yī). 2012(10)
[6]枳術(shù)吳茱萸湯治療老年胃食管反流病28例探討[J]. 李季委,李凌霞.  中醫(yī)藥信息. 2007(01)

碩士論文
[1]基于熱敏通道TRPV1、TRPA1探討吳茱萸湯的散寒止痛機理[D]. 劉珍洪.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2017



本文編號：3445461