目的快速純化大鼠大腦皮質(zhì)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。方法取新生2日齡SD大鼠大腦皮層,每2只為一組,將剝除軟腦膜的大腦皮層剪碎,添加0. 25%胰蛋白酶-EDTA溶液500μL,37℃消化15 min,將細(xì)胞懸液接種于未用多聚賴氨酸處理過的培養(yǎng)瓶中,37℃、5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育15 min后,將細(xì)胞以5×10⁶個/m L接種于L-多聚賴氨酸包被的T75培養(yǎng)瓶中。待細(xì)胞長滿瓶底,200 r/min 37℃恒溫?fù)u18 h,加入1 m L 0. 25%胰蛋白酶,待大部分細(xì)胞懸浮后收集細(xì)胞。在倒置相差顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,膠質(zhì)纖維酸性蛋白免疫熒光染色法進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定,并以MTS法測定傳代后細(xì)胞增殖活力。結(jié)果星形膠質(zhì)細(xì)胞純度達(dá)到（97. 86±0. 91）%,細(xì)胞傳代后生長情況及增殖活力良好。結(jié)論該方法可以高效獲取原代及傳代的大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞。 

【文章來源】：衛(wèi)生研究. 2019,48(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑和儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)處理
    1.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞的純化及培養(yǎng)
        1.3.1 取出大腦皮質(zhì)，剝除軟腦膜
        1.3.2 胰蛋白酶消化
        1.3.3 差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞
        1.3.4 恒溫振搖純化星形膠質(zhì)細(xì)胞
        1.3.5 傳代培養(yǎng)
    1.4 免疫熒光法鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞
    1.5 細(xì)胞增殖活力測定
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)
    2.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定結(jié)果
    2.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)結(jié)果
    2.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞傳代后細(xì)胞增殖活力
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種改進(jìn)的大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)方法[J]. 丁娟,丁敬賓,馬小虎,關(guān)立鋒,楊慧瑩,王志軍,劉娟.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2017(03)
[2]恒河猴大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J]. 王建斌,馮敏,廖蕓,王麗春,張瑩,范勝濤,李琦涵.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)



本文編號：3438672