本文關(guān)鍵詞：低血清及無(wú)血清培養(yǎng)Vero細(xì)胞和甲型流感病毒（H1N1）的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病,嚴(yán)重危害人類的生命健康。流感的預(yù)防尚無(wú)特別有效的方法,接種流感疫苗是目前最好的途徑。雞胚是流感病毒最為常用的一種培養(yǎng)基質(zhì),常用它來(lái)制備流感疫苗和分離流感病毒。然而雞胚生產(chǎn)流感疫苗存在很多不足：生產(chǎn)過(guò)程易受微生物的污染；雞蛋過(guò)敏者不適用；遺傳穩(wěn)定性差；難以在短時(shí)間內(nèi)提供足夠的雞胚生產(chǎn)疫苗以應(yīng)對(duì)流感大流行。鑒于雞胚流感疫苗的局限性,哺乳動(dòng)物細(xì)胞流感疫苗具有重要的運(yùn)用前景。 Vero細(xì)胞是WHO推薦用于疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì),可采用微載體發(fā)酵大規(guī)模培養(yǎng),己廣泛用于人類疫苗的生產(chǎn)。低血清及無(wú)血清培養(yǎng)Vero細(xì)胞一方面能解決正常細(xì)胞培養(yǎng)液中殘留的牛血清對(duì)流感病毒有效感染必不可少的胰酶的中和作用,從而提高流感病毒在Vero細(xì)胞上的繁殖能力,獲得高病毒滴度的流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株；另一方面,減少甚至消除了牛血清中不明確的成分及未知的病原體,提高了流感疫苗的生物安全性。 一、Vero細(xì)胞和H1N1流感病毒的低血清培養(yǎng) 本研究通過(guò)對(duì)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配比,添加不同濃度小牛血清進(jìn)行Vero細(xì)胞的連續(xù)傳代培養(yǎng),觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,確定最低血清添加量為2%；以MTT法確定DMEM/F12:MEM (1:1)混合物為最適合用來(lái)培養(yǎng)Vero細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。同時(shí)對(duì)低血清培養(yǎng)H1N1流感病毒的較適條件進(jìn)行摸索。 二、Vero細(xì)胞和H1N1流感病毒的無(wú)血清培養(yǎng) 選擇DMEM/F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加一定比例的蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子、促貼壁因子等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和貼壁的物質(zhì),初步優(yōu)化出適合Vero細(xì)胞生長(zhǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基。采用不同的胞齡、pH、TPCK-胰酶濃度等培養(yǎng)條件進(jìn)行探索,對(duì)H1N1流感病毒在無(wú)血清培養(yǎng)的Vero細(xì)胞上的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,篩選出H1N1流感病毒的較適培養(yǎng)條件為：胞齡為36h、pH值在7.2-7.4之間、TPCK-胰酶含量為0.8μg/ml、基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12與MEM的混合物、病毒增殖時(shí)間為48h。
【關(guān)鍵詞】：Vero細(xì)胞 低血清 無(wú)血清 H1N1流感病毒
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 第一部分 Vero細(xì)胞和H1N1流感病毒的低血清培養(yǎng)7-22
• 前言7
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法7-12
• 二、結(jié)果和分析12-18
• 三、討論18-19
• 四、小結(jié)19-20
• 參考文獻(xiàn)20-22
• 第二部分 Vero細(xì)胞和H1N1流感病毒的無(wú)血清培養(yǎng)22-49
• 前言22-24
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法24-30
• 二、結(jié)果和分析30-45
• 三、討論45-46
• 四、小結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 展望49-50
• 附錄Ⅰ 縮略詞50-51
• 附錄Ⅱ 基本實(shí)驗(yàn)操作51-57
• 附錄Ⅲ 主要溶液的配制57-61
• 致謝61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62-63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：343258