本文關(guān)鍵詞：中國藏、漢人群UGT1A9，1A7遺傳多態(tài)性的比較分析及結(jié)直腸癌候選基因3’UTR功能風險預(yù)警標志物的初步篩查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)作為一類重要的Ⅱ相藥物代謝酶催化葡萄糖酸化反應(yīng),負責35%的Ⅱ相藥物代謝。因而,UGT酶在藥物代謝過程中發(fā)揮著非常重要的作用,需要我們加深對其的了解。但是UGTs的活性存在個體及種族間的差異,影響臨床藥物療效及藥物的安全性,而造成該差異的原因是由于基因組中大量遺傳多態(tài)性位點的存在。因此,全面系統(tǒng)的了解UGT家族基因的遺傳多態(tài)性將有助于有效的開展個體化用藥,從而提高藥物療效減少毒副作用。本課題選取該家族中重要的兩個基因UGT1A9.1A7作為研究對象,國內(nèi)外已經(jīng)對這兩個基因進行了不少深入研究,但關(guān)于中國藏族人群及藏漢民族遺傳信息的比較相對較少。 中國是一個由56個民族組成的大民族國家,漢族是最大的一個民族人口占中國總?cè)丝诘?0.56%,而藏族則是中國少數(shù)民族中的一個主要民族,由于種族及地域的差別可能也會造成遺傳信息的差異。該研究以藏、漢兩個民族人群為研究對象,隨機選取這兩個民族健康志愿者各100例,對正常人群UGT1A9.1A7基因的遺傳多態(tài)性做了全面系統(tǒng)研究。研究結(jié)果如下： 1.UGT1A9中共檢測到21個變異位點,其中7個是新發(fā)現(xiàn)的變異。三個高頻變異(-1888TG,95246TC,96292CT)的等位基因頻率在藏漢民族間具有顯著性差異。UGT1A7中檢測到27個變異位點,其中三處高頻變異(-561AC,85243TC,86289CT)的等位基因頻率在藏、漢民族間具有顯著性差異。此外,功能預(yù)測結(jié)果顯示,-1888G,一1819C.-441T,-57G影響了轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合。 2.UGT1A9*1b,UGT1A7*3是中國人群主要的缺陷等位基因。 3.單倍體型分析表明,ACTCTC是藏族人群主要的單體型,頻率為52.9%；TCTCGT是漢族人群主要的單體型,頻率為57%。此外,CCC是中國人群主要的一種單體型,頻率約為85%。 本研究中,我們系統(tǒng)的對藏、漢民族UGT1A9.IA7的遺傳信息進行了分析,發(fā)現(xiàn)等位基因和基因型頻率、連鎖不平衡模式(Linkage disequilibrium,LD)、單體型及標簽SNPs在兩民族中是存在一定差異的。因此,本研究中UGT1A9.1A7藏、漢人群的遺傳信息將為更多的有關(guān)藥代動力學的研究奠定一定的理論基礎(chǔ),同時也為中國藏、漢人群開展個體化醫(yī)療提供數(shù)據(jù)來源。 第二部分 microRNAs (miRNAs)是一組小、非編碼的RNA序列,長度大約18-22個核苷酸。miRNA通過和靶基因3’非編碼區(qū)(3'Untranslated regions,3'UTR)結(jié)合,在細胞分化、細胞周期的進行、細胞應(yīng)答反應(yīng)及細胞凋亡等細胞過程中發(fā)揮關(guān)鍵性的基因表達調(diào)控作用。已有不少研究證實,位于miRNA靶位點的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNPs)會影響miRNA的結(jié)合及靶基因的表達。目前已經(jīng)報道了miRNA靶標位點的SNPs與銀屑病、阿爾茨海默病、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等的發(fā)病風險相關(guān)。 目前,雖有少量關(guān)于miRNA靶標位點的SNPs與結(jié)直腸癌發(fā)病風險的報道,但這些研究僅僅是通過病例－對照研究分析了SNPs與結(jié)直腸癌發(fā)病的風險,并未對靶基因的功能影響進行深入的研究,也未從真正意義上揭示miRNA與靶基因的調(diào)控關(guān)系。本研究借助生物信息學軟件篩選了三個位于散發(fā)性結(jié)直腸癌候選基因CD86(rs17281995), APC (rs6875894), KRAS (rs7960917)3'UTR的miRNA作用靶點的SNPs,通過構(gòu)建候選基因3'UTR的野生型及突變型的雙熒光素報告基因表達載體分析SNPs位點對miRNA發(fā)揮調(diào)控作用的影響。針對雙熒光素報告基因篩查有意義的位點,進一步研究預(yù)測的miRNA與靶基因的相互作用關(guān)系,主要通過Western Blot和實時定量PCR從不同表達水平研究]miRNA對靶基因的調(diào)控。研究結(jié)果如下： 1.雙熒光素酶篩選結(jié)果顯示,與CD863'UTR含G等位基因的重組子共轉(zhuǎn)染的miR-582-3p降低了熒光素酶的活力,而對含C等位基因的重組子的熒光素酶活力沒有影響。 2.Western Blot和實時定量PCR結(jié)果顯示,miR-582-3p inhibitor抑制了miR-582-3p對靶基因的調(diào)控,使得CD86mRNA及蛋白的表達量均顯著上升。 本研究從一定意義上說明了miR-582-3p與CD86調(diào)控關(guān)系,但還需要在中國大樣本的結(jié)直腸癌及疾病對照人群中進行統(tǒng)計關(guān)聯(lián)分析,明確該位點是否也是中國散發(fā)性結(jié)直腸癌人群的一個新的功能風險預(yù)警遺傳標志物。
【關(guān)鍵詞】：UGT1A9 UGT1A7 遺傳多態(tài)性 連鎖不平衡 單體型 藏族人 漢族人 結(jié)直腸癌 miRNA 3’UTR CD86 APC KRAS 功能遺傳風險標志物
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R735.37;R394
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第一部分 中國藏漢人群UGTM9,1A7遺傳多態(tài)性的比較分析12-44
• 第一章 緒論12-24
• 1.1 藥物基因組學12-15
• 1.1.1 藥物基因組學概述12
• 1.1.2 藥物基因組學的產(chǎn)生背景12-13
• 1.1.3 藥物基因組學的研究內(nèi)容及研究方法13-15
• 1.1.4 藥物基因組學與個體化用藥15
• 1.1.5 藥物基因組學實際運用中的挑戰(zhàn)15
• 1.2 UGTs藥物代謝酶15-22
• 1.2.1 UGTs的命名16-17
• 1.2.2 分布狀態(tài)17-18
• 1.2.3 UGTs基因的遺傳多態(tài)性18-22
• 1.2.4 UGTs催化底物的多樣性22
• 1.3 本課題選題意義22-24
• 第二章 藥物代謝基因UGT1A9,1A7遺傳多態(tài)性在藏漢民族間的差異比較24-44
• 2.1 實驗材料與儀器24-26
• 2.1.1 研究對象24
• 2.1.2 所需試劑24-25
• 2.1.3 所需儀器25
• 2.1.4 主要溶液配置25-26
• 2.2 實驗方法26-30
• 2.2.1 血液采集26
• 2.2.2 基因組DNA的提取26
• 2.2.3 SNPs的掃描和選擇26-28
• 2.2.4 基因分型28-29
• 2.2.5 統(tǒng)計學分析29-30
• 2.2.6 多態(tài)性位點的功能預(yù)測30
• 2.3 實驗結(jié)果30-40
• 2.3.1 中國藏、漢人群UGT1A9,1A7遺傳變異的確定30-34
• 2.3.2 UGT1A9,1A7等位基因和基因型頻率34-36
• 2.3.3 UGT1A9,1A 7 LD/單體型分析36-38
• 2.3.4 功能預(yù)測結(jié)果38-40
• 2.4 小結(jié)與討論40-44
• 第二部分 結(jié)直腸癌候選基因3'UTR功能風險預(yù)警標志物的初步研究44-82
• 第一章 緒論44-60
• 1.1 結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)概述44
• 1.2 microRNAs(miRNAs)與疾病44-54
• 1.2.1 miRNA的生物合成44-46
• 1.2.2 miRNAs表達譜研究46-49
• 1.2.3 miRNA在腫瘤發(fā)生中的作用49-51
• 1.2.4 miRNAs在結(jié)直腸癌發(fā)展、治療及預(yù)后中的作用51-54
• 1.3 miRNAs及miRNAs靶位點多態(tài)性與疾病發(fā)生的關(guān)系54-58
• 1.3.1 miRNA啟動子區(qū)的SNPs與疾病的關(guān)系54-55
• 1.3.2 miRNA前體的SNPs與疾病的關(guān)系55-57
• 1.3.3 miRNA靶位點SNPs與疾病的關(guān)系57-58
• 1.4 本課題選題意義58-60
• 第二章 結(jié)直腸癌候選基因(CD86,APC,KRAS)靶miRNAs的篩查研究60-82
• 2.1 實驗材料與儀器60-62
• 2.1.1 載體、菌株、細胞系60
• 2.1.2 所需試劑60-61
• 2.1.3 所需儀器61-62
• 2.1.4 主要溶液配置62
• 2.2 實驗方法62-72
• 2.2.1 結(jié)直腸癌候選基因的選擇62-63
• 2.2.2 候選基因靶miRNAs的預(yù)測63
• 2.2.3 目的片段的擴增63-64
• 2.2.4 擴增片段跑瓊脂糖凝膠電泳及目的片段的膠回收64-65
• 2.2.5 T克隆重組載體的構(gòu)建65-66
• 2.2.6 擬研究位點的定點突變66-69
• 2.2.7 候選基因野生型及突變型重組表達載體的構(gòu)建69-70
• 2.2.8 細胞功能實驗70-71
• 2.2.9 雙熒光素酶活力檢測71
• 2.2.10 miRNA對內(nèi)源基因表達的影響71-72
• 2.3 實驗結(jié)果72-79
• 2.3.1 結(jié)直腸癌候選基因的確定73
• 2.3.2 候選基因靶miRNAs的預(yù)測結(jié)果73
• 2.3.3 目的片段的擴增73-74
• 2.3.4 野生型及突變型重組T克隆載體的鑒定74-77
• 2.3.5 野生型及突變型重組表達載體的鑒定77
• 2.3.6 雙螢光素酶報告基因檢測結(jié)果77-78
• 2.3.7 miRNA對內(nèi)源基因表達的影響78-79
• 2.4 小結(jié)與討論79-82
• 參考文獻82-91
• 攻讀碩士學位期間取得的科研成果91-92
• 致謝92

【參考文獻】

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：中國藏、漢人群UGT1A9，1A7遺傳多態(tài)性的比較分析及結(jié)直腸癌候選基因3’UTR功能風險預(yù)警標志物的初步篩查，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：341103