本文關(guān)鍵詞：中國(guó)藏、漢人群UGT1A9，1A7遺傳多態(tài)性的比較分析及結(jié)直腸癌候選基因3’UTR功能風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警標(biāo)志物的初步篩查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGTs)作為一類重要的Ⅱ相藥物代謝酶催化葡萄糖酸化反應(yīng),負(fù)責(zé)35%的Ⅱ相藥物代謝。因而,UGT酶在藥物代謝過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用,需要我們加深對(duì)其的了解。但是UGTs的活性存在個(gè)體及種族間的差異,影響臨床藥物療效及藥物的安全性,而造成該差異的原因是由于基因組中大量遺傳多態(tài)性位點(diǎn)的存在。因此,全面系統(tǒng)的了解UGT家族基因的遺傳多態(tài)性將有助于有效的開展個(gè)體化用藥,從而提高藥物療效減少毒副作用。本課題選取該家族中重要的兩個(gè)基因UGT1A9.1A7作為研究對(duì)象,國(guó)內(nèi)外已經(jīng)對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行了不少深入研究,但關(guān)于中國(guó)藏族人群及藏漢民族遺傳信息的比較相對(duì)較少。 中國(guó)是一個(gè)由56個(gè)民族組成的大民族國(guó)家,漢族是最大的一個(gè)民族人口占中國(guó)總?cè)丝诘?0.56%,而藏族則是中國(guó)少數(shù)民族中的一個(gè)主要民族,由于種族及地域的差別可能也會(huì)造成遺傳信息的差異。該研究以藏、漢兩個(gè)民族人群為研究對(duì)象,隨機(jī)選取這兩個(gè)民族健康志愿者各100例,對(duì)正常人群UGT1A9.1A7基因的遺傳多態(tài)性做了全面系統(tǒng)研究。研究結(jié)果如下： 1.UGT1A9中共檢測(cè)到21個(gè)變異位點(diǎn),其中7個(gè)是新發(fā)現(xiàn)的變異。三個(gè)高頻變異(-1888TG,95246TC,96292CT)的等位基因頻率在藏漢民族間具有顯著性差異。UGT1A7中檢測(cè)到27個(gè)變異位點(diǎn),其中三處高頻變異(-561AC,85243TC,86289CT)的等位基因頻率在藏、漢民族間具有顯著性差異。此外,功能預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,-1888G,一1819C.-441T,-57G影響了轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合。 2.UGT1A9*1b,UGT1A7*3是中國(guó)人群主要的缺陷等位基因。 3.單倍體型分析表明,ACTCTC是藏族人群主要的單體型,頻率為52.9%；TCTCGT是漢族人群主要的單體型,頻率為57%。此外,CCC是中國(guó)人群主要的一種單體型,頻率約為85%。 本研究中,我們系統(tǒng)的對(duì)藏、漢民族UGT1A9.IA7的遺傳信息進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)等位基因和基因型頻率、連鎖不平衡模式(Linkage disequilibrium,LD)、單體型及標(biāo)簽SNPs在兩民族中是存在一定差異的。因此,本研究中UGT1A9.1A7藏、漢人群的遺傳信息將為更多的有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)的研究奠定一定的理論基礎(chǔ),同時(shí)也為中國(guó)藏、漢人群開展個(gè)體化醫(yī)療提供數(shù)據(jù)來(lái)源。 第二部分 microRNAs (miRNAs)是一組小、非編碼的RNA序列,長(zhǎng)度大約18-22個(gè)核苷酸。miRNA通過(guò)和靶基因3’非編碼區(qū)(3'Untranslated regions,3'UTR)結(jié)合,在細(xì)胞分化、細(xì)胞周期的進(jìn)行、細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性的基因表達(dá)調(diào)控作用。已有不少研究證實(shí),位于miRNA靶位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNPs)會(huì)影響miRNA的結(jié)合及靶基因的表達(dá)。目前已經(jīng)報(bào)道了miRNA靶標(biāo)位點(diǎn)的SNPs與銀屑病、阿爾茨海默病、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。 目前,雖有少量關(guān)于miRNA靶標(biāo)位點(diǎn)的SNPs與結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的報(bào)道,但這些研究?jī)H僅是通過(guò)病例－對(duì)照研究分析了SNPs與結(jié)直腸癌發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn),并未對(duì)靶基因的功能影響進(jìn)行深入的研究,也未從真正意義上揭示miRNA與靶基因的調(diào)控關(guān)系。本研究借助生物信息學(xué)軟件篩選了三個(gè)位于散發(fā)性結(jié)直腸癌候選基因CD86(rs17281995), APC (rs6875894), KRAS (rs7960917)3'UTR的miRNA作用靶點(diǎn)的SNPs,通過(guò)構(gòu)建候選基因3'UTR的野生型及突變型的雙熒光素報(bào)告基因表達(dá)載體分析SNPs位點(diǎn)對(duì)miRNA發(fā)揮調(diào)控作用的影響。針對(duì)雙熒光素報(bào)告基因篩查有意義的位點(diǎn),進(jìn)一步研究預(yù)測(cè)的miRNA與靶基因的相互作用關(guān)系,主要通過(guò)Western Blot和實(shí)時(shí)定量PCR從不同表達(dá)水平研究]miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控。研究結(jié)果如下： 1.雙熒光素酶篩選結(jié)果顯示,與CD863'UTR含G等位基因的重組子共轉(zhuǎn)染的miR-582-3p降低了熒光素酶的活力,而對(duì)含C等位基因的重組子的熒光素酶活力沒(méi)有影響。 2.Western Blot和實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,miR-582-3p inhibitor抑制了miR-582-3p對(duì)靶基因的調(diào)控,使得CD86mRNA及蛋白的表達(dá)量均顯著上升。 本研究從一定意義上說(shuō)明了miR-582-3p與CD86調(diào)控關(guān)系,但還需要在中國(guó)大樣本的結(jié)直腸癌及疾病對(duì)照人群中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)關(guān)聯(lián)分析,明確該位點(diǎn)是否也是中國(guó)散發(fā)性結(jié)直腸癌人群的一個(gè)新的功能風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警遺傳標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：UGT1A9 UGT1A7 遺傳多態(tài)性 連鎖不平衡 單體型 藏族人 漢族人 結(jié)直腸癌 miRNA 3’UTR CD86 APC KRAS 功能遺傳風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R735.37;R394
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第一部分 中國(guó)藏漢人群UGTM9,1A7遺傳多態(tài)性的比較分析12-44
• 第一章 緒論12-24
• 1.1 藥物基因組學(xué)12-15
• 1.1.1 藥物基因組學(xué)概述12
• 1.1.2 藥物基因組學(xué)的產(chǎn)生背景12-13
• 1.1.3 藥物基因組學(xué)的研究?jī)?nèi)容及研究方法13-15
• 1.1.4 藥物基因組學(xué)與個(gè)體化用藥15
• 1.1.5 藥物基因組學(xué)實(shí)際運(yùn)用中的挑戰(zhàn)15
• 1.2 UGTs藥物代謝酶15-22
• 1.2.1 UGTs的命名16-17
• 1.2.2 分布狀態(tài)17-18
• 1.2.3 UGTs基因的遺傳多態(tài)性18-22
• 1.2.4 UGTs催化底物的多樣性22
• 1.3 本課題選題意義22-24
• 第二章 藥物代謝基因UGT1A9,1A7遺傳多態(tài)性在藏漢民族間的差異比較24-44
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器24-26
• 2.1.1 研究對(duì)象24
• 2.1.2 所需試劑24-25
• 2.1.3 所需儀器25
• 2.1.4 主要溶液配置25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-30
• 2.2.1 血液采集26
• 2.2.2 基因組DNA的提取26
• 2.2.3 SNPs的掃描和選擇26-28
• 2.2.4 基因分型28-29
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 2.2.6 多態(tài)性位點(diǎn)的功能預(yù)測(cè)30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-40
• 2.3.1 中國(guó)藏、漢人群UGT1A9,1A7遺傳變異的確定30-34
• 2.3.2 UGT1A9,1A7等位基因和基因型頻率34-36
• 2.3.3 UGT1A9,1A 7 LD/單體型分析36-38
• 2.3.4 功能預(yù)測(cè)結(jié)果38-40
• 2.4 小結(jié)與討論40-44
• 第二部分 結(jié)直腸癌候選基因3'UTR功能風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警標(biāo)志物的初步研究44-82
• 第一章 緒論44-60
• 1.1 結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)概述44
• 1.2 microRNAs(miRNAs)與疾病44-54
• 1.2.1 miRNA的生物合成44-46
• 1.2.2 miRNAs表達(dá)譜研究46-49
• 1.2.3 miRNA在腫瘤發(fā)生中的作用49-51
• 1.2.4 miRNAs在結(jié)直腸癌發(fā)展、治療及預(yù)后中的作用51-54
• 1.3 miRNAs及miRNAs靶位點(diǎn)多態(tài)性與疾病發(fā)生的關(guān)系54-58
• 1.3.1 miRNA啟動(dòng)子區(qū)的SNPs與疾病的關(guān)系54-55
• 1.3.2 miRNA前體的SNPs與疾病的關(guān)系55-57
• 1.3.3 miRNA靶位點(diǎn)SNPs與疾病的關(guān)系57-58
• 1.4 本課題選題意義58-60
• 第二章 結(jié)直腸癌候選基因(CD86,APC,KRAS)靶miRNAs的篩查研究60-82
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器60-62
• 2.1.1 載體、菌株、細(xì)胞系60
• 2.1.2 所需試劑60-61
• 2.1.3 所需儀器61-62
• 2.1.4 主要溶液配置62
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法62-72
• 2.2.1 結(jié)直腸癌候選基因的選擇62-63
• 2.2.2 候選基因靶miRNAs的預(yù)測(cè)63
• 2.2.3 目的片段的擴(kuò)增63-64
• 2.2.4 擴(kuò)增片段跑瓊脂糖凝膠電泳及目的片段的膠回收64-65
• 2.2.5 T克隆重組載體的構(gòu)建65-66
• 2.2.6 擬研究位點(diǎn)的定點(diǎn)突變66-69
• 2.2.7 候選基因野生型及突變型重組表達(dá)載體的構(gòu)建69-70
• 2.2.8 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)70-71
• 2.2.9 雙熒光素酶活力檢測(cè)71
• 2.2.10 miRNA對(duì)內(nèi)源基因表達(dá)的影響71-72
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果72-79
• 2.3.1 結(jié)直腸癌候選基因的確定73
• 2.3.2 候選基因靶miRNAs的預(yù)測(cè)結(jié)果73
• 2.3.3 目的片段的擴(kuò)增73-74
• 2.3.4 野生型及突變型重組T克隆載體的鑒定74-77
• 2.3.5 野生型及突變型重組表達(dá)載體的鑒定77
• 2.3.6 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果77-78
• 2.3.7 miRNA對(duì)內(nèi)源基因表達(dá)的影響78-79
• 2.4 小結(jié)與討論79-82
• 參考文獻(xiàn)82-91
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果91-92
• 致謝92

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳玲玲;中國(guó)漢族人群CYP2C19基因遺傳多態(tài)性分析[D];上海交通大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：中國(guó)藏、漢人群UGT1A9，1A7遺傳多態(tài)性的比較分析及結(jié)直腸癌候選基因3’UTR功能風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警標(biāo)志物的初步篩查，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：341103