第一部分增強(qiáng)型特異性表達(dá)載體組合的構(gòu)建、病毒包裝和純化目的構(gòu)建由Cre/LoxP介導(dǎo)的增強(qiáng)型特異性表達(dá)載體組合（包含調(diào)控載體Lenti-LEP503-HSVtk-Cre和靶載體Lenti-HPGK-Loxp-EGFP-pA-Loxp-HSVtk）,即增強(qiáng)型慢病毒介導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞（HLEC）特異性啟動子LEP503誘導(dǎo)的單純皰疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鳥苷（HSV-tk/GCV）系統(tǒng),以建立高效特異的慢病毒轉(zhuǎn)基因平臺。方法利用分子克隆技術(shù),用PCR方法從Lenti-Cre中克隆Cre酶,亞克隆至T載體,經(jīng)EcoRI和SalI雙酶切,同時質(zhì)粒Lenti-LEP503-HSVtk-EGFP經(jīng)EcoRI和SalI雙酶切,定向連接得調(diào)控載體Lenti-LEP503-HSVtk-Cre;人工合成片段Loxp-polyA-Loxp,polyA前含PmeI酶切位點,與T載體連接后,插入兩端含pmeI酶切位點的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）全序列引物擴(kuò)增的片段,形成Loxp-EGFP-pA-Loxp載體,與質(zhì)粒PRRL一起經(jīng)BamHI和SalI雙酶切,定向連接。PCR方法克隆IRES-HSVtk,兩端... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

實驗用載體質(zhì)粒酶切圖譜，pSPAXZ，pMDZ.G，pRRLSIN.ePPT.PGK/GFP.WPRE，PLOX一CW一CRE，T載體

刀口日卜/z八PBS一rl’!aCZHHH認(rèn)dll】】3.okbEroR皿P過5.以B.皿.HISP目11八」匡心d一︸l.00翻l-SxN一../7T載{{、圖1實驗用載體質(zhì)粒酶切圖譜，pSPAXZ，pMDZ.G，pRRLSIN.ePPT.PGK/GFP.WPRE，PLOX一CW一CRE，T載體。

Lenti一HPGK一Loxp一EGFP一pA一L

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3389501