發(fā)布時間：2021-09-07 11:55

　　第一部分增強型特異性表達載體組合的構建、病毒包裝和純化目的構建由Cre/LoxP介導的增強型特異性表達載體組合（包含調控載體Lenti-LEP503-HSVtk-Cre和靶載體Lenti-HPGK-Loxp-EGFP-pA-Loxp-HSVtk）,即增強型慢病毒介導人晶狀體上皮細胞（HLEC）特異性啟動子LEP503誘導的單純皰疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鳥苷（HSV-tk/GCV）系統(tǒng),以建立高效特異的慢病毒轉基因平臺。方法利用分子克隆技術,用PCR方法從Lenti-Cre中克隆Cre酶,亞克隆至T載體,經EcoRI和SalI雙酶切,同時質粒Lenti-LEP503-HSVtk-EGFP經EcoRI和SalI雙酶切,定向連接得調控載體Lenti-LEP503-HSVtk-Cre;人工合成片段Loxp-polyA-Loxp,polyA前含PmeI酶切位點,與T載體連接后,插入兩端含pmeI酶切位點的增強型綠色熒光蛋白（EGFP）全序列引物擴增的片段,形成Loxp-EGFP-pA-Loxp載體,與質粒PRRL一起經BamHI和SalI雙酶切,定向連接。PCR方法克隆IRES-HSVtk,兩端... 

【文章來源】：復旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

實驗用載體質粒酶切圖譜，pSPAXZ，pMDZ.G，pRRLSIN.ePPT.PGK/GFP.WPRE，PLOX一CW一CRE，T載體

刀口日卜/z八PBS一rl’!aCZHHH認dll】】3.okbEroR皿P過5.以B.皿.HISP目11八」匡心d一︸l.00翻l-SxN一../7T載{{、圖1實驗用載體質粒酶切圖譜，pSPAXZ，pMDZ.G，pRRLSIN.ePPT.PGK/GFP.WPRE，PLOX一CW一CRE，T載體。

Lenti一HPGK一Loxp一EGFP一pA一L

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]基因導向性酶前體藥物療法在腫瘤治療中的研究進展[J]. 郭志英,王浩毅.  國外醫(yī)學(腫瘤學分冊). 2003(04)
[4]腺病毒載體介導的單純皰疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鳥苷體系對晶狀體上皮細胞的作用[J]. 王冰,翁景寧.  中華眼科雜志. 2002(10)
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[7]慢病毒介導的單純皰疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鳥苷體系抑制人晶狀體上皮細胞的研究[J]. 楊晉,盧奕,郭禮和,劉天津,莫曉芬.  中華眼科雜志. 2007 (09)



本文編號：3389501