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抗輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶(NRDR)單克隆抗體的制備和鑒定

發(fā)布時間:2021-09-05 07:19
  全反式維甲酸(All-trans retinoic acid, atRA)是維生素A(Vitamin A)的代謝產(chǎn)物,是脊椎動物體內(nèi)重要的生物活性物質(zhì),通過與其核內(nèi)受體結(jié)合調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄參與細胞生長、細胞分化、形態(tài)發(fā)生、免疫功能調(diào)節(jié)等生理過程。在抗感染、抑制腫瘤細胞生長及增殖、誘導(腫瘤)細胞分化和凋亡等方面,維甲酸類化合物也具有廣泛的生物學作用。臨床上,維甲酸類化合物已廣泛應用于預防及治療一些惡性腫瘤,包括乳腺癌、皮膚癌、宮頸癌、早幼粒細胞白血病等。體內(nèi)維甲酸類化合物的平衡受飲食及其相關代謝酶等因素的影響,其相關酶類調(diào)控代謝的機制至今仍未完全闡明。輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶(NADP(H) dependent retinol dehydrogenase/reductase, NRDR)是從兔肝中發(fā)現(xiàn)并純化的一種酶,具有很強的視黃醇氧化與視黃醛還原活性。視黃醇(Ratinol)在體內(nèi)經(jīng)兩步代謝生成維甲酸,中間代謝產(chǎn)物為視黃醛(Ratinal)。Ratinol生成Ratinal的反應是體內(nèi)維甲酸合成的限速步驟,因此NRDR在調(diào)節(jié)生物體內(nèi)維甲酸的穩(wěn)態(tài)過程中起著重要作用。鑒于NRDR分子... 

【文章來源】:汕頭大學廣東省

【文章頁數(shù)】:53 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

抗輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶(NRDR)單克隆抗體的制備和鑒定


單克隆抗體制備技術(shù)Fig1-2TheProductionofMonoclonalAntibodies

示意圖,細胞融合,示意圖,基因工程抗體


圖 1-3 細胞融合與 HAT 選擇示意圖Fig1-3 principle of cell fusing and HAT selectingengineered antibodies, GEAs)技術(shù)[28]。基因工程抗體可以對抗體的單區(qū)、最小識別單位、Fv、Fab,甚至是完整的抗體分子進行改造,大大降低了鼠單克隆抗體的異源性,具有低或無免疫原性、組織穿透力強、分子量小、成本低、可規(guī)模化生產(chǎn)等特點,同時還可以根據(jù)需要在抗體分子上連接治療或診斷運用的藥物及其他分子,這使得單克隆抗體在臨床治療中有了更廣闊的應用前景。雖然目前對基因工程抗體的研究很活躍,但細胞工程技術(shù)由于其制備方法簡單且得到的抗體性能穩(wěn)定并有較高活性,故目前仍是研究制備單克隆抗體的首選方法,故本實驗仍采用傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)來制備抗 NRDR 的單抗。

誘導表達,蛋白S,凝膠,菌株


M2 1-1 誘導表達的兔 NRDR 蛋白 SDS-PA標準; 1:表達菌株誘導前 2:3-1 SDS-PAGE of the recombinant raber 1: bacterial lysate witho bacterial lysate with L-Ara induction f層析純化rose柱后大部分附著于凝膠上,用 50-PAGE分析,目的蛋白在含 500 mm26

【參考文獻】:
期刊論文
[1]兔輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶的功能性表達、純化及活性鑒定[J]. 謝健平,劉戈飛,宋旭紅,杜昆,李蕊,梁斌,張巧霞,黃東陽.  汕頭大學醫(yī)學院學報. 2007(01)
[2]全反式維甲酸聯(lián)合三氧化二砷治療初發(fā)APL的進展[J]. 周建中,薛樺.  臨床軍醫(yī)雜志. 2006(06)
[3]一種人神經(jīng)母細胞瘤輔酶II-依賴性視黃醇脫氫酶cDNA的克隆及特征分析[J]. 李一凡,劉戈飛,宋旭紅,杜昆,黃東陽.  癌變.畸變.突變. 2005(06)
[4]抗慢性B淋巴細胞白血病患者IgM單抗相對親和力的分析[J]. 沈關心,蘇娜,王曉林,朱慧芬,張悅,劉少祥.  細胞與分子免疫學雜志. 1992(03)



本文編號:3384907

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