本文關(guān)鍵詞：DMOG對兔骨髓間充質(zhì)干細胞體外增殖與成骨分化影響的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討脯氨酸羥化酶抑制劑二甲基乙二�；拾彼�(Dimethyloxalyl glycine, DMOG)對兔骨髓間充質(zhì)干細胞體外增殖和成骨分化的影響,為DMOG進一步進行體內(nèi)試驗提供理論支撐。 方法 取正常健康的新西蘭大白兔1只,予以3%戊巴比妥靜脈麻醉,無菌操作下取出雙后側(cè)股骨干,用DMEM/F12完全培養(yǎng)液沖洗髓腔,得到細胞懸液,用貼壁法去除未貼壁的細胞及多次傳代純化細胞。 第一步：對骨髓間充質(zhì)干細胞進行分離、培養(yǎng)和鑒定； a于第1d、3d、7d、12d分別對原代細胞和傳代細胞進行細胞形態(tài)的觀察； b對第2代和第5代的的細胞在1d,3d,5d,7d,9d,11d時分別對細胞生長動力學進行檢測； c細胞免疫化學檢測P3細胞表面的CD44表達； d配制7組不同濃度的DMOG溶液(濃度范圍調(diào)整為100umol/L-2000umol/L),并設(shè)置單純培養(yǎng)液作為對照,觀察不同濃度的DMOG溶液對細胞的光密度值和ALP表達的影響。 第二步：取傳代至第3代的骨髓間充質(zhì)干細胞,按培養(yǎng)液的不同,將P3代細胞分為三組,A組含500umol/LDMOG的成骨誘導分化劑培養(yǎng)液組B組含成骨誘導分化劑的培養(yǎng)液組C組單純的培養(yǎng)液組, a、于14天和21天時,用Gomori鈣鈷法觀察3組培養(yǎng)溶液對BMSCs堿性磷酸酶表達的影響和用Von-Kossa改良染色法觀察3組培養(yǎng)溶液對BMSCs成骨分化中鈣沉積的影響： b、于5d、10d、15d、20d時,用MTB比色法對三組細胞內(nèi)鈣離子進行定量檢測,所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,統(tǒng)計方法采用單因素方差分析,數(shù)據(jù)采用SPSS17.0進行分析； c、于5d、10d、15d、20d時,用ELISA法對三組細胞內(nèi)對骨鈣素蛋白進行檢測,所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,統(tǒng)計方法采用單因素方差分析,數(shù)據(jù)采用SPSS17.0進行分析； 結(jié)果 培養(yǎng)48小時即可見細胞貼壁生長,類似成纖維細胞樣,約96小時后,細胞形態(tài)開始轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形,多次對細胞進行換液,對純化后的細胞用免疫化學法進行檢測,結(jié)果表明我們所分離的骨髓單個細胞CD44(+)； 當DMOG濃度為100umol/L-500umol/L時,隨著DMOG溶液濃度增加,培養(yǎng)的細胞OD值不斷下降,但堿性磷酸酶的表達不斷上調(diào),對數(shù)據(jù)予以統(tǒng)計學分析,發(fā)現(xiàn)：100umol/L-500umol/L內(nèi)各組DMOG溶液對細胞的增殖有抑制作用,但P0.05,差異無統(tǒng)計學意義,對ALP的表達進行分析時得出P0.05,差異有統(tǒng)計學意義； 當DMOG濃度為500umol/L-2000umol/L時,隨著DMOG溶液濃度增加,培養(yǎng)的細胞OD值不斷下降,并且堿性磷酸酶的表達不斷下調(diào),對數(shù)據(jù)予以統(tǒng)計學分析,發(fā)現(xiàn)：500umol/L-2000umol/L內(nèi)各組DMOG溶液對細胞的增殖有抑制作用,且P0.05,差異有統(tǒng)計學意義,對ALP的表達進行分析時得出P0.05,差異有統(tǒng)計學意義； 檢測堿性磷酸酶的Gomori鈣鈷染色法表明,含500umol/LDMOG的培養(yǎng)液能明顯上調(diào)細胞成骨分化中ALP的表達,檢測鈣沉積的Von-Kossa改良染色法表明,含500umol/LDMOG的培養(yǎng)液能明顯使鈣沉積增加； 用MTB染色法對鈣進行定量檢測,得出含500umol/LDMOG的培養(yǎng)液能使鈣含量明顯增加,與其他兩組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義； 用ELISA法對細胞內(nèi)骨鈣素蛋白的表達進行定量檢測,得出含500umol/LDMOG的培養(yǎng)液能使骨鈣素表達明顯上調(diào),與其他兩組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義； 結(jié)論 1.實驗中所獲的骨髓單個核細胞就是骨髓間充質(zhì)干細胞。 2.當DMOG濃度為100umol/L-500umol/L時,與其余各組比較,DMOG對細胞的增殖抑制作用差異無統(tǒng)計學意義,但對ALP的表達是增強的,差異有統(tǒng)計學意義； 當DMOG濃度為500umol/L-2000umol/L時,與其余各組比較,DMOG對細胞的增殖抑制作用差異有統(tǒng)計學意義,細胞內(nèi)ALP表達量也逐漸下調(diào),差異具有統(tǒng)計學意義,即隨著濃度的增加,其對增殖的抑制作用逐漸增強,且細胞內(nèi)ALP的表達逐漸下調(diào)； DMOG濃度為500umol/L時,對細胞的增殖的抑制作用最小,并且對ALP的表達效果最強； 3.含500umol/LDMOG的培養(yǎng)液能明顯增加BMSCs成骨分化中的鈣含量與上調(diào)BMSCs成骨分化中的骨鈣素表達。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 脯氨酸羥化酶抑制劑二甲基乙二�；拾彼� 細胞增殖 成骨分化 鈣定量檢測
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 參考文獻14-16
• 材料與方法16-27
• 結(jié)果27-44
• 討論44-50
• 結(jié)論50
• 課題的局限性50-51
• 參考文獻51-56
• 綜述56-63
• 參考文獻60-63
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文的情況63-64
• 致謝64

【參考文獻】

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1 吳洪福;鄧宇斌;嚴云發(fā);全大萍;司美君;;Pluronic F-127水凝膠復合骨髓間充質(zhì)干細胞構(gòu)建組織工程化脂肪的體外研究[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：DMOG對兔骨髓間充質(zhì)干細胞體外增殖與成骨分化影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：338468