發(fā)布時(shí)間：2017-05-01 04:12

  本文關(guān)鍵詞：異種移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠肝切除模型發(fā)生病理學(xué)反應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 20世紀(jì)醫(yī)學(xué)界最杰出的成就之一是人類移植學(xué)的發(fā)展，而輸血技術(shù)則是人類最早的細(xì)胞移植，進(jìn)入21世紀(jì)后，臨床細(xì)胞移植術(shù)進(jìn)一步發(fā)展，其代表性的成果自然是骨髓移植和同種胰島移植，近20年來(lái)，由于臨床移植受體的大量增加，供體顯著短缺，干細(xì)胞移植成為生命科學(xué)領(lǐng)域的另一研究熱點(diǎn)，部分學(xué)者已經(jīng)認(rèn)為干細(xì)胞移植是治療器官終末期病變的有效手段之一。 細(xì)胞移植是指將適量游離的具有某種功能的活細(xì)胞輸注到受體的血管、體腔或組織器官內(nèi)，由于間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能、低免疫原性及免疫調(diào)節(jié)功能,在理論上肯定了干細(xì)胞移植的優(yōu)勢(shì)。Lu等[1]發(fā)現(xiàn)臍血間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)MHC-Ⅱ分子，低水平表達(dá)MHC-Ⅰ分子, Ⅰ類分子是由非共價(jià)鍵連接的兩條肽鏈組成的糖蛋白,分布于幾乎所有有核細(xì)胞表面，其重要生理功能是對(duì)CD8T細(xì)胞的抗原識(shí)別功能起限制性作用，主要介導(dǎo)Tc細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，是重要的移植抗原；Ⅱ類分子的分布比較局限，主要表達(dá)于B細(xì)胞、單核－巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞上，是引起移植排斥反應(yīng)的重要靶抗原，包括引起宿主抗移植物反應(yīng)（Host versus graft reaction，hvgr）和移植物抗宿主反應(yīng)（Graft-versus-host reaction，gvhr），理論上間充質(zhì)干細(xì)胞具有低免疫原性。在過(guò)去10年里，大量的文獻(xiàn)還反映出間充質(zhì)干細(xì)胞具強(qiáng)大的免疫抑制作用，Prigione等[2]發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞抑制細(xì)胞毒性CD4~+、CD8~+T細(xì)胞的增殖，減少干擾素的產(chǎn)生，也一定程度上抑制自然殺傷細(xì)胞和γδT細(xì)胞的增殖和功能。鑒于上述特點(diǎn)，將綠色熒光蛋白標(biāo)記的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植入與人類有相似器官、相近基因的大鼠體內(nèi)，觀察異種移植細(xì)胞能否在大鼠體內(nèi)存活、分化，為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本文分兩部分，分別探討以下問(wèn)題：（1）研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定的方法；（2）制備大鼠部分肝切除模型，利用慢病毒載體介導(dǎo)EGFP轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，將標(biāo)記細(xì)胞移植入肝損傷大鼠體內(nèi)，觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的存活、分化及再生肝組織病理、肝臟功能的變化，探討間充質(zhì)干細(xì)胞能否用于異種移植。 第一部分人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定 目的：研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定方法，觀察其生物學(xué)特性。 方法：青年健康孕婦足月后行剖宮產(chǎn)術(shù)，術(shù)中獲得無(wú)菌臍帶組織，應(yīng)用膠原酶Ⅱ消化篩選人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物以及對(duì)其進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，對(duì)培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：運(yùn)用膠原酶消化法可以獲得純化的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。該方法獲得的人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，經(jīng)傳代，呈典型的長(zhǎng)梭形，可渦旋或放射排列；流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)該細(xì)胞的表面標(biāo)志物，高度表達(dá)CD90、CD73、CD105，不表達(dá)或低表達(dá)CD34、CD31、HLA-DR；成脂誘導(dǎo)兩周，經(jīng)油紅“O”染色，鏡下可見脂滴呈紅色，成骨誘導(dǎo)3周，經(jīng)茜素紅染色，鏡下可見深紅的鈣鹽沉淀。上述結(jié)果均符合典型的生物學(xué)間充質(zhì)干細(xì)胞特征。 結(jié)論：膠原酶消化法可以獲得高度純化的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，以供本研究使用。 第二部分人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞異種移植的可行性分析 目的：探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能否在大鼠體內(nèi)存活、分化，及觀察異種移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠肝損傷修復(fù)的影響。 方法：取生長(zhǎng)活躍的293T細(xì)胞，以慢病毒為載體，增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Enhanced green fluorescent protein，EGFP）為目的基因，以不同的感染復(fù)數(shù)（Multiplicity of infection，，MOI）感染293T細(xì)胞，收集富含EGFP慢病毒顆粒的細(xì)胞上清，濃縮后計(jì)算病毒濃度，以1:100的感染復(fù)數(shù)感染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)干細(xì)胞內(nèi)EGFP的表達(dá)；成功標(biāo)記后，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)門靜脈注入肝部分切除的大鼠體內(nèi)，術(shù)后3個(gè)月，以膠原酶法分離肝組織細(xì)胞，同時(shí)制作再生肝葉的病理切片，以確定干細(xì)胞的存活、分化狀態(tài)及肝組織修復(fù)情況，經(jīng)腹主動(dòng)脈抽血檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組、模型組與對(duì)照組的肝功能的差異。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染成功的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在熒光顯微鏡下呈綠色梭形，綠色熒光充滿胞漿；移植術(shù)后3個(gè)月，病理切片提示模型組為正常肝組織，實(shí)驗(yàn)組肝組織結(jié)構(gòu)較模型組紊亂，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，肝細(xì)胞內(nèi)淤膽，血管內(nèi)有微栓形成，部分壞死的干細(xì)胞團(tuán)栓塞肝內(nèi)血管，分離獲得的部分細(xì)胞在共聚焦顯微鏡下發(fā)出較弱的綠光，胞核成多核樣改變；模型組肝功能明顯優(yōu)于實(shí)驗(yàn)組（P0.05）。 結(jié)論：異種移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在觀察期內(nèi)部分存活于大鼠體內(nèi)并分化，但實(shí)驗(yàn)組病理切片提示明顯的病理學(xué)反應(yīng)，轉(zhuǎn)氨酶水平也高于其余兩組，結(jié)合異種移植的本質(zhì)，大鼠的肝臟可能無(wú)法給植入的人間充質(zhì)干細(xì)胞提供完全適宜增殖和分化的微環(huán)境。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 分離 鑒定 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白 轉(zhuǎn)染 異種移植
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R657.3;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-18
• 參考文獻(xiàn)13-18
• 第一部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定18-31
• 前言18
• 材料和方法18-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 第二部分 EGFP 標(biāo)記的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞行異種移植的可行性分析31-46
• 前言31
• 材料和方法31-36
• 結(jié)果36-40
• 討論40-42
• 結(jié)論42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述一46-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述二54-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-64
• 附錄-Ⅰ 校期間發(fā)表的論文64-65
• 附錄-Ⅱ 附圖65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 萬(wàn)匯涓,張芳婷,龍霞,葉靜,于潔,房家智;人臍血細(xì)胞在肝損傷裸鼠體內(nèi)向肝細(xì)胞的分化[J];解剖學(xué)報(bào);2005年05期

2 韓翠萍;劉吉勇;高蕾;裴慶山;孫欣欣;文婷玉;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的體外擴(kuò)增及向類肝細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J];山東醫(yī)藥;2010年07期

3 唐曉瓊;趙智剛;王紅祥;李秋柏;鄒萍;;人臍靜脈來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的體外分離擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年42期

  本文關(guān)鍵詞：異種移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠肝切除模型發(fā)生病理學(xué)反應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：338205