發(fā)布時(shí)間：2017-05-01 02:11

  本文關(guān)鍵詞：硝苯地平對RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇外流影響的試驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 巨噬細(xì)胞在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色，巨噬細(xì)胞來源的泡沫細(xì)胞存在于動脈粥樣硬化病變的各個(gè)階段，在各種促動脈粥樣硬化因素的作用下，血液中的單核巨噬細(xì)胞侵入動脈血管內(nèi)皮下吞噬脂蛋白，在細(xì)胞質(zhì)中沉積大量膽固醇酯形成泡沫細(xì)胞，并促進(jìn)病灶逐步發(fā)展。膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)(reverse cholesterol transport，RCT)可促進(jìn)外周組織和巨噬細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)膽固醇的清除，延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展，是機(jī)體抗動脈粥樣硬化最重要的機(jī)制之一。 既往多項(xiàng)研究表明硝苯地平具有抗動脈粥樣硬化效應(yīng)；但硝苯地平抗動脈粥樣硬化效應(yīng)具體機(jī)制未明確，硝苯地平逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化斑塊是否與增強(qiáng)病變巨噬細(xì)胞膽固醇外流作用相關(guān)未見報(bào)道。本研究擬使用硝苯地平干預(yù)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞，探討硝苯地平對RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇外流影響及其具體機(jī)制。 方法 1. RAW264.7細(xì)胞以1×10~5／ml密度種植在24孔板中，每孔加入3H標(biāo)記的膽固醇1微居(7.4x103iq／ml)孵育12h。用PBS漂洗3次后加入硝苯地平濃度分別為0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L無血清DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液各3ml，孵育48小時(shí)。將細(xì)胞培養(yǎng)液置換為3ml無血清含ApoA-I (10μg/mL)或HDL (50μg/mL)的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液,孵育24小時(shí)后檢測每細(xì)胞培養(yǎng)孔的RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流率變化。 2.濃度分別為1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的硝苯地平干預(yù)RAW264.7細(xì)胞24小時(shí)后，，使用RT-PCR檢測ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因mRNA表達(dá)水平；濃度分別為1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的硝苯地平干預(yù)RAW264.7細(xì)胞48小時(shí)后，使用Western blotting方法檢測ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因蛋白表達(dá)水平。 3. RAW264.7細(xì)胞以1×10~7／ml密度種植在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24小時(shí)，用PBS清洗1次后各加入硝苯地平濃度各為0nmol/L、0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L。向第一瓶細(xì)胞中加入陰性對照siRNA，向第二至第五瓶中加入LXRα siRNA培養(yǎng)96小時(shí)后使用Western blotting方法檢測ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因蛋白表達(dá)情況。 4. RAW264.7細(xì)胞以1×10~5／ml密度種植在24孔板中，每孔加入~3H標(biāo)記的膽固醇1微居(7.4x10~3iq／ml)孵育12h，用PBS漂洗2次后各加入硝苯地平濃度各為0nmol/L、0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L無血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液。向第一孔細(xì)胞中加入陰性對照siRNA，向第二至第五孔中加入第二對LXRα siRNA，孵育48小時(shí)。將細(xì)胞培養(yǎng)液置換為3ml無血清含ApoA-I (10μg/mL)或HDL (50μg/mL)的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液,孵育24小時(shí)后檢測每細(xì)胞培養(yǎng)孔的RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流率變化。 結(jié)果 1.與對照組比較，濃度為1,10,100nmol/L的硝苯地平明顯增加ApoA-I介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇外流(巨噬細(xì)胞膽固醇外流率分別從2.55%提高到5.65%,6.20%,6.10%，p0.05)；與對照組比較，濃度為1,10,100nmol/L的硝苯地平明顯增加HDL介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膽固醇外流(巨噬細(xì)胞膽固醇外流率分別從31.0%增加42.5%,46.0%,43.5%, p0.05) 2.與對照組比較，濃度為1,10,100nmol/L的硝苯地平明顯增加RAW264.7巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因mRNA表達(dá)水平(405%,381%,336%；890%,960%,1002%；285%,325%,336%；482%,445%,405%；分別, p0.05)；與對照組比較，濃度為1,10,100nmol/L的硝苯地平明顯增加RAW264.7巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因蛋白表達(dá)水平(428%,492%,361%；288%,331%,365%；283%,320%,505%；581%,678%,608%；分別, p0.05)。 3. LXRα siRNA干預(yù)后，硝苯地平對RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流相關(guān)基因的刺激作用均受抑制。 4. LXRα siRNA干預(yù)LXRα后，硝苯地平對RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流的促進(jìn)作用均受抑制。 結(jié)論： 1.硝苯地平增強(qiáng)巨噬細(xì)胞膽固醇外流，減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積，防止巨噬細(xì)胞泡沫化。 2.硝苯地平明顯增強(qiáng)RAW264.7巨噬細(xì)胞ABCA1、ABCG1、SR-BI、LXRα基因mRNA及蛋白表達(dá)水平(P0.05)。 3. LXRα siRNA干預(yù)LXRα基因表達(dá)后，硝苯地平對RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流相關(guān)基因的增強(qiáng)作用受抑制。 4. LXRα siRNA干預(yù)LXRα基因表達(dá)后，硝苯地平對RAW264.7巨噬細(xì)胞膽固醇外流的增強(qiáng)作用受抑制。
【關(guān)鍵詞】：膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn) 動脈粥樣硬化 脂蛋白A-I 高密度脂蛋白 肝X受體
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• Abstract7-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 硝苯地平對 RAW264.7 巨噬細(xì)胞膽固醇外流的影響16-26
• 2.1 材料和方法16-19
• 2.2 結(jié)果19
• 2.3 討論19-25
• 2.4 小結(jié)25-26
• 第三章 硝苯地平對巨噬細(xì)胞膽固醇外流相關(guān)基因表達(dá)的影響26-38
• 3.1 材料和方法26-33
• 3.2 結(jié)果33-35
• 3.3 討論35-37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第四章 LXRa siRNA 干擾 LXRa 基因表達(dá)的檢測38-52
• 4.1 有效 LXRa siRNA 片段的篩選38-41
• 4.1.1 材料和方法38-39
• 4.1.2 結(jié)果39
• 4.1.3 討論39-41
• 4.1.4 小結(jié)41
• 4.2 LXRα siRNA 干擾后相關(guān)基因的 Western blotting 檢測41-47
• 4.2.1 材料和方法41-44
• 4.2.2 結(jié)果44-46
• 4.2.3 討論46
• 4.2.4 小結(jié)46-47
• 4.3 LXRa siRNA 干擾后 RAW264.7 細(xì)胞膽固醇外流率變化47-52
• 4.3.1 材料和方法47-49
• 4.3.2 結(jié)果49-50
• 4.3.3 討論50-51
• 4.3.4 小結(jié)51-52
• 全文總結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 文獻(xiàn)綜述 肝 X 受體對調(diào)節(jié)膽固醇代謝的調(diào)控60-71
• 參考文獻(xiàn)66-71
• 研究生階段發(fā)表文章71-72
• 致謝72

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 謝彬;呂湛;;ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1研究進(jìn)展[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2009年01期

2 褚昀峗;劉先哲;;轉(zhuǎn)化生長因子-β和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在動脈粥樣硬化中的研究[J];國際心血管病雜志;2011年04期

3 王來娣;鄭云;蔣拾貝;王星果;張軍;龔道清;;miRNA在脂代謝中的研究進(jìn)展[J];動物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2013年07期

4 徐艷杰;程曉曙;;巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇代謝與動脈粥樣硬化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年02期

5 趙國軍;湯石林;田國平;歐陽新平;呂運(yùn)成;何平平;姚峰;唐艷艷;吳劍鋒;王甲林;張敏;唐朝克;;肝X受體激動劑T0901317對脂多糖誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎性因子釋放的影響及其機(jī)制[J];中國動脈硬化雜志;2013年07期

6 倪占玲;高傳玉;趙水平;;普羅布考對體內(nèi)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的影響與機(jī)制[J];臨床心血管病雜志;2014年01期

7 孫海閣;田迪;譚迎;劉挺榕;羅甜甜;賴文巖;郭志剛;;皮下免疫熱休克蛋白65對高密度脂蛋白抗炎抗氧化功能的影響[J];中國動脈硬化雜志;2013年11期

8 孫明慧;馬依彤;;ABCA1與早發(fā)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病[J];中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志;2010年03期

9 ;Northern Chinese Han populations with sporadic Alzheimer’s disease and the role of urokinase-type plasminogen activator gene promoter polymorphisms[J];Neural Regeneration Research;2010年02期

10 陳競緯;郁曉;錢培剛;馬榮林;趙笑東;;清熱化痰祛瘀方對高脂血癥大鼠肝SR-BImRNA及蛋白表達(dá)的影響[J];上海中醫(yī)藥雜志;2013年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 丁楊;Wei Wang;Jianping Zhou;;仿生型納米載體介導(dǎo)的靶向siRNA遞送系統(tǒng)的研究(英文)[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（上冊，大會報(bào)告）[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何峰穎;抗AT1受體細(xì)胞外第二環(huán)肽抗體參與動脈粥樣硬化發(fā)病的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 蘇曼曼;重組人高密度脂蛋白的研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 王術(shù)玲;小檗堿聯(lián)合厚樸酚對THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的干預(yù)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

4 陳國良;早發(fā)冠心病患者高密度脂蛋白（HDL）蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

5 吳斯杰;肝X受體與小鼠心臟功能及能量代謝的相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2010年

6 楊柳;載脂蛋白M與肥胖代謝異常及其干預(yù)探討[D];中南大學(xué);2010年

7 梁輝;TGF-β1基因SNPs及單體型分子標(biāo)志與長沙漢族人群腦卒中的相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2010年

8 莫中成;AOPPs對巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)與膽固醇流出的影響及機(jī)制[D];南華大學(xué);2011年

9 蔡愛芳;運(yùn)動對二VA英致大鼠脂質(zhì)合成代謝障礙的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D];北京體育大學(xué);2013年

10 張馮筱;1型多聚ADP核糖合成酶調(diào)控代謝性核受體轉(zhuǎn)錄激活的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭春生;C3、C4B1、ApoE在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

2 孫明慧;ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1基因R219K多態(tài)性在新疆維漢民族中的分布特征及與冠心病和血脂的相關(guān)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

3 劉春紅;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血載脂蛋白E表達(dá)及意義[D];山東大學(xué);2007年

4 李星潔;針刺豐隆穴預(yù)防小鼠高膽固醇血癥的相關(guān)基因研究[D];四川大學(xué);2007年

5 湯厚闊;胰腺癌血清腫瘤標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

6 謝彬;阿托伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[D];川北醫(yī)學(xué)院;2010年

7 張瑞環(huán);高齡冠心病患者脂類代謝與冠狀動脈粥樣硬化相關(guān)性分析及急性心肌梗死介入治療近期療效分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

8 趙鵬;油酸通過PKC-LXR-LRH1途徑調(diào)節(jié)載脂蛋白M的表達(dá)[D];蘇州大學(xué);2013年

9 何英肖;基于LXRs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑探討澤瀉湯防治高脂血癥的作用機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

10 劉燕;ApoM啟動子-855位點(diǎn)突變對基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的影響[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2013年

  本文關(guān)鍵詞：硝苯地平對RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞膽固醇外流影響的試驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：338025