本實驗室前期的研究已經(jīng)證實,日本血吸蟲未成熟蟲卵可溶性抗原26-28kDa（SIEA26-28kDa）和成蟲31-32kDa蛋白（Sj31-32kDa）天然分子均可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生較好的抗雌蟲、抗卵胚免疫效果。但是由于天然分子抗原疫苗的分離及批量制備相對困難,束縛了其在現(xiàn)場防治中的應(yīng)用。近幾年來,本課題組一直致力于篩選、鑒定天然分子疫苗的編碼基因,隨后構(gòu)建了幾種天然分子疫苗相關(guān)的核酸疫苗,包括SIEA26-28kDa相關(guān)的pcDNA3.0/SjHGPRT、pcDNA3.0/SjSDISP、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjRPL7,Sj31/32kDa相關(guān)的pcDNA3.0/SjCB等,并證實幾種疫苗均能產(chǎn)生一定程度的免疫保護力,但單一的核酸疫苗的免疫保護效果尚有待進一步提高。因此,本研究內(nèi)容之一是將SjRPS4、SjCB兩種編碼天然分子疫苗的目的基因構(gòu)建成雙價疫苗,觀察其免疫小鼠后抗日本血吸蟲攻擊感染的保護效果;研究之二是通過采用“初免-加強”的免疫策略,將pcDNA3.0/SjSDISP核酸疫苗、Sj31-32天然分子疫苗聯(lián)合起來進行免疫,觀察是否可以在減少天然分子... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

習(xí)RPs4.cB在小鼠肌肉細胞的表達(醉免疾組織化學(xué)染色，x100)

peDNA3.0/Sj砂54·CB、 peDNA3.0/SjRPs4及pVAXI、peDNA3.o空載體、pBs對照，14d后取肌肉組織切片進行間接免疫熒光及酶免疫組織化學(xué)檢測。HE染色顯示切片位置正確(圖1一6);間接免疫熒光及酶免疫組織化學(xué)染色顯示顯示疫苗組小鼠肌細胞中呈現(xiàn)較強的綠色熒光或棕黃色顆粒，而對照組肌細胞內(nèi)呈陰性反應(yīng)(圖l一7，l一8)。上述結(jié)果證明pVAXI/SjRPS4·CB、peDNA3刀茍Rps4·CB在小鼠肌細胞中成功表達。 A(X100)B(X200)圖1一6:小鼠肌組織HE染色Figurel一6:Kun爪 ingmousetissuestainedwithHE圖1一7:習(xí)RPs4.cB在小鼠肌肉細胞的表達(醉免疾組織化學(xué)染色，x100)Figl一 7:.ExPreosionofPVAXllS)RPS4· CBandpcDNA3.0左砂RPS4· CBinquadricePsfemoris ofKunmingmise(Immunohistochemist叮assay，xl00) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP:C:PVAXIgrouP;D:PeDNA3， 0/SjRPS4grouP:E:PeDNA3.0/SjRPS4· CBgrouP:F:PVAXI/SjRPS4· CBgrouP

碩士學(xué)位論文第一部分 DEF圖1一 8:sjRPs4.cB在小鼠肌肉細胞的表達(間接免疚熒光檢測，xl00)Figl一 8:.ExPressionofPVAXI/SjRPS4· CBandPcDNA3刀茍RPS4·CB inquadrieePsfemorisofKunmingmise(IFA，X100) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP;C:PVAXIgrouP:D:PeDNA3.0/習(xí) RPS4grouP:E:PeDNA3.0/S/RPS4· CBgrouP;F:PVAXI/Sj’RPS4· CBgrouP 2.6pVAXI/邃爪PS4·CB、pcDNA3.0/國聲PS4·CB雙價疫苗免疫保護效果觀察攻擊感染后42天剖殺小鼠，可見PBS、PcDNA3、pVAXI空白質(zhì)粒對照組的小鼠肝臟呈暗褐色，蟲卵結(jié)節(jié)細密;pVAXI/SjRpS4·CB(v3)、 peDNA3.o/SjRPs4·eB(DS)·PcDNA3.0/SjRPS4、PcDNA3.o/SjCB免疫組的小鼠肝臟色澤較鮮紅，蟲卵結(jié)節(jié)較少(圖1一9)。.協(xié)叮下〕}一’-.…巨二}、〔二〕廠，)Figl一

【參考文獻】：
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本文編號：3379622