發(fā)布時間：2021-08-21 07:12

　　目的初步探討肥大細(xì)胞活化劑compound 48/80（C48/80）聯(lián)合乙肝疫苗對實驗小鼠抗體產(chǎn)生、淋巴細(xì)胞增殖的影響,尋找能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答能力的佐劑。方法 Balb/c小鼠經(jīng)肩背部皮下注射C48/80,甲苯胺藍(lán)法檢測肥大細(xì)胞活化狀態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測肩上和腋窩局部引流淋巴結(jié)（draining lymph nodes,DLN）細(xì)胞懸液中樹突狀細(xì)胞（dendritic cell,DC）的數(shù)量;采用3種劑量C48/80聯(lián)合乙肝疫苗免疫小鼠,ELISA法檢測不同時間點血清乙肝表面抗體（抗-HBs）的含量,CCK-8試劑檢測DLN淋巴細(xì)胞增殖活性。結(jié)果皮下注射C48/80可誘導(dǎo)小鼠局部皮膚肥大細(xì)胞活化,24 h脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)占局部肥大細(xì)胞總數(shù)比例為82%±5.2%;C48/80處理后DLN細(xì)胞總數(shù)和DC數(shù)量較對照組明顯增多。C48/80聯(lián)合乙肝疫苗免疫小鼠后3周和4周時血清中抗-HBs含量較單純乙肝疫苗免疫組明顯升高;C48/80處理組小鼠特異性淋巴細(xì)胞增殖能力較單純乙肝疫苗免疫組明顯增強(qiáng)。結(jié)論肥大細(xì)胞活化劑C48/80能夠在較早時間點增強(qiáng)小鼠對乙肝疫苗的免疫應(yīng)答,其機(jī)制可能與C48/8... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2015,31(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮膚肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色(400×)

唬?嘀植≡?宄煞蕁⒉?體片段和小分子肥大細(xì)胞活化劑等可活化肥大細(xì)胞，圖1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮膚肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsat24hfollowingsubcutaneousinjectionofnormalsaline(a)orCompound48/80(b)(400×).**P<0.01,***P<0.001.RepresentativeimagesofFACSanalysisforDLNCD11c+cellsinNStreated(a)andC48/80treated(b)micewereshown,andthetotalcell(c)andCD11c+cell(d)numberincontrolandC48/80treatedsidewerestatisticallyanalyzed.圖2NS或C48/80處理肩背部皮膚后24hDLN中細(xì)胞總數(shù)、DC細(xì)胞數(shù)檢測Fig2ThenumberoftotalcellsandCD11c+cellsindraininglymphnodes24hafterNSorC48/80treatedscapularskin*P<0.05,**P<0.01.a)anti-HBsconcentrationineachimmunizedmouse;b)comparisonofanti-HBsindifferentimmunizedmice.圖3免疫后小鼠血清抗-HBs的變化Fig3Changesofanti-HBsinserumofimmunizedmice·665·

為16%±3.4%，兩者之間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（n=3，P＜0.05）。2.2C48/80可誘導(dǎo)局部淋巴結(jié)腫大C48/80注射后不同時間點取DLN制備單細(xì)胞懸液，并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD11c+DC細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果表明C48/80注射后DLN體積增大，DLN細(xì)胞總數(shù)隨C48/80處理后時間的推移逐漸增多，C48/80處理后24h淋巴結(jié)細(xì)胞總數(shù)大約為NS對照組細(xì)胞總數(shù)的4倍，DC細(xì)胞數(shù)量約為對照組6倍（圖2）。2.3各免疫組小鼠抗-HBs的檢測疫苗接種后7d各組小鼠體內(nèi)均未見明顯抗體產(chǎn)生，14d時可測得極少量抗體出現(xiàn)，21、28和35d時各組抗體量均明顯增加（圖3a）。其中21、28d時抗-HBs增加量在不同組別間存在明顯差異，12.5μg和25μgC48/80聯(lián)合乙肝疫苗免疫組血清抗體含量較單純乙肝疫苗免疫組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，35d時各免疫組抗體含量均較高，各組之間比較差異無顯著性（圖3b）。2.4淋巴細(xì)胞增殖實驗C48/80聯(lián)合乙肝疫苗肩背部皮膚末次免疫后，取局部引流肩上和腋窩淋巴結(jié)，CCK-8試劑檢測淋巴細(xì)胞對HBsAg的特異性增殖反應(yīng)，結(jié)果如圖4所示。各實驗組與未加乙肝疫苗免疫組小鼠（對照組）比較，特異性淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。單純乙肝疫苗免疫組和加入C48/80免疫組小鼠相比較，C48/80聯(lián)合免疫組小鼠較未加C48/80處理組小鼠特異性淋巴細(xì)胞增殖能力提高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。12.5μgC48/80和25μgC48/80免疫組小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3討論肥大細(xì)胞和DC均存在于病原體及其他因子易于侵入的外周皮膚和黏膜部位，多種病原體成份、補(bǔ)體片段和小分子肥大細(xì)胞活化劑等可活化肥大細(xì)胞，圖1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮膚肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsa

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鋁佐劑吸附CpG ODN增強(qiáng)重組乙肝疫苗免疫效應(yīng)[J]. 王麗麗,馬波,錢雯,柴俊東,趙志宏,白梅,唐業(yè)峰,李鐳,楊喆.  免疫學(xué)雜志. 2015(01)



本文編號：3355133