本文關(guān)鍵詞：D181調(diào)控TLR9信號影響DCs分泌CXCL-10的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Toll樣受體(Toll like receptors, TLRs)是一種主要表達(dá)于樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells, DCs)、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞的病源模式識別受體,其通過識別不同的病原微生物活化特異的信號通路,能夠激活天然免疫和獲得性免疫從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)。目前,哺乳動物中已發(fā)現(xiàn)的TLRs有13種,人類中有10種,小鼠中有13種。其中,TLR9通過識別未甲基化的富CpG-DNA介導(dǎo)機(jī)體對病毒、細(xì)菌的清除,在多種免疫性疾病如自身免疫病、腫瘤等中發(fā)揮關(guān)鍵作用,是治療疾病的關(guān)鍵所在。DCs是體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞,在天然免疫和適應(yīng)性免疫的銜接中起著關(guān)鍵的作用。含CpG基序寡核苷酸(CpG-ODN)可激活DCs的TLR9通路促進(jìn)其成熟并影響DCs的免疫功能。目前臨床上用于調(diào)控DCs的TLR9信號通路的藥物非常有限且并不完善,因此尋找新的有效的小分子藥物有望彌補(bǔ)治療手段的不足。 本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)表明,D181可以抑制TLR4信號通路的活化,調(diào)控相關(guān)炎癥因子的產(chǎn)生,改善TLR4通路相關(guān)疾病膿毒癥的癥狀。本課題以小鼠骨髓誘導(dǎo)來源的樹突狀細(xì)胞作為研究對象,研究D181對CpG誘導(dǎo)活化的樹突狀細(xì)胞的影響并探討D181對DCs的TLR9通路的調(diào)控機(jī)制。 首先我們用CCK8法檢測D181對BMDCs的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示一定濃度內(nèi)的D181(0-200μM)對細(xì)胞的活力沒有影響。接著我們用Annexin V/PI雙染法檢測D181對BMDCs凋亡的影響,發(fā)現(xiàn)在0-200μM范圍內(nèi)D181不影響B(tài)MDCs凋亡。隨后我們用實(shí)時熒光定量PCR檢測D181對CpG刺激的BMDCs分泌的促炎性細(xì)胞因子(IL-12, IL-6, CXCL-10和TNF-α)在mRNA水平表達(dá)的影響,顯示D181能夠抑制CpG引起的BMDCs促炎性細(xì)胞因子的表達(dá),其中D181對CXCL-10表達(dá)的抑制效果最為明顯。CXCL10(interferon-y inducible protein10, CXCL-10)是一種屬于CXC亞家族的趨化因子,主要表達(dá)于成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及DCs等細(xì)胞,能夠介導(dǎo)DCs與T細(xì)胞的相互作用,而且在多種疾病如SLE、AR、腫瘤等的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。CXCL-10與DCs的功能相關(guān),因此我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測BMDCs表面標(biāo)志(CD80, CD86, CD40, MHCⅡ),發(fā)現(xiàn)D181可以下調(diào)表面標(biāo)志和共刺激因子的表達(dá)。用吞噬實(shí)驗(yàn)檢測D181對BMDCs細(xì)胞吞噬FITC-右旋糖酐能力的影響,發(fā)現(xiàn)D181不影響B(tài)MDCs的吞噬功能。 為進(jìn)一步探索D181對CXCL-10產(chǎn)生的影響及其作用機(jī)制,我們用不同濃度的D181預(yù)處理后加入CpG刺激,檢測CXCL-10的mRNA水平和蛋白水平的變化,發(fā)現(xiàn)D181能夠在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平劑量依賴性抑制CXCL-10的表達(dá)。為研究BMDCs中CXCL-10變化的作用,用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測D181對BMDCs趨化T細(xì)胞能力的影響,發(fā)現(xiàn)與單獨(dú)CpG刺激相比,加入D181后BMDCs趨化T細(xì)胞的能力明顯下降。為研究D181發(fā)生作用的機(jī)制,用ERK、JNK、p38和STAT1的通路抑制劑預(yù)處理BMDCs,檢測CpG刺激BMDCs引起的CXCL-10的mRNA及蛋白水平的變化,結(jié)果顯示這些處理均可以明顯降低CXCL-10的表達(dá)。接著,用VVestern blot分析D181對ERK、JNK、p38和STAT1通路活化的影響,發(fā)現(xiàn)其能夠明顯抑制ERK、JNK、p38和STAT1的磷酸化。 綜上所述,我們首次發(fā)現(xiàn)小分子化合物D181能夠通過調(diào)控TLR9通路抑制CpG引起的BMDCs的成熟和功能,并可以調(diào)控CXCL-10的表達(dá),且主要通過MAPK和STA1信號通路發(fā)揮作用,這就提示我們D181可能會成為治療CXCL-10相關(guān)疾病的潛在藥物。
【關(guān)鍵詞】：D181 樹突狀細(xì)胞 TLR9 CXCL-10
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392;R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-12
• 縮略詞表12-14
• 前言14-17
• 第一章 TLR9信號通路在樹突狀細(xì)胞參與的免疫調(diào)控中作用的研究進(jìn)展17-23
• 1 樹突狀細(xì)胞的研究概況17-20
• 1.1 樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性17-18
• 1.2 樹突狀細(xì)胞與疾病18-20
• 2 TLR9信號通路20-21
• 2.1 Toll樣受體20
• 2.2 DCs中TLR9通路與疾病20-21
• 3 小分子化合物藥用開發(fā)前景21-23
• 第二章 D181抑制TLR9配體誘導(dǎo)的炎性因子的產(chǎn)生23-33
• 1 引言23
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-31
• 3.1 骨髓來髓DCs的誘導(dǎo)與鑒定28-29
• 3.2 D181不影響B(tài)MDCs活力29
• 3.3 D181不影響B(tài)MDCs凋亡29-30
• 3.4 D181抑制CpG誘導(dǎo)的BMDCs炎癥因子的表達(dá),其中CXCL-10變化尤為顯著30-31
• 4 討論31-33
• 第三章 D181抑制TLR9配體誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞表型和功能的成熟33-39
• 1 引言33
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法33-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-37
• 3.1 D181對CpG誘導(dǎo)的表面標(biāo)志表達(dá)有抑制作用35-36
• 3.2 D181不影響B(tài)MDCs的吞噬36-37
• 4 討論37-39
• 第四章 D181對TLR9通路中CXCL-10的調(diào)控機(jī)制39-48
• 1 引言39
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法39-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-46
• 3.1 D181抑制CpG誘導(dǎo)BMDCs中CXCL-10的表達(dá)43
• 3.2 D181抑制BMDCs的趨化功能43-44
• 3.3 MAPK和STAT1通路調(diào)控CXCL-10的產(chǎn)生44-45
• 3.4 D181通過MAPK和STAT1抑制CXCL-10的產(chǎn)生45-46
• 4 討論46-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 附錄55-58
• 碩士期間科研成果58-59
• 致謝59-60

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉日明;Toll樣受體與Th1/Th2的應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).免疫學(xué)分冊;2005年02期

2 袁良平,艾國平,粟永萍;樹突狀細(xì)胞的免疫治療進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2000年S1期

3 陳向榮,陸京伯,石漢平;樹突狀細(xì)胞與特異性細(xì)胞免疫[J];免疫學(xué)雜志;2001年03期

4 范萍,武正炎,王水,查小明,甄林林;人外周血中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)、培養(yǎng)及其表面標(biāo)記的初步研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年01期

5 陳敏;樹突狀細(xì)胞疫苗[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年03期

6 張浩,鄭樹森,蔣國平,謝海洋;小鼠肝癌樹突狀細(xì)胞融合瘤苗促進(jìn)腫瘤凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J];科技通報(bào);2005年02期

7 張吉才,繆繼武,楊寧;人外周血樹突狀細(xì)胞對LAK細(xì)胞殺傷活性的影響[J];免疫學(xué)雜志;1996年04期

8 邱立華;樹突狀細(xì)胞的研究近況[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年02期

9 王曉,錢振超,裴雪濤;樹突狀細(xì)胞聯(lián)合自殺基因tk及其效應(yīng)的研究[J];中國腫瘤生物治療雜志;1999年03期

10 劉欣,張學(xué)軍,孫自敏,朱薇波;樹突狀細(xì)胞與抗腫瘤免疫[J];國外醫(yī)學(xué).腫瘤學(xué)分冊;2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)鑒定[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 張慶紅;胡玉珍;呂順艷;鐘延清;;雌激素影響大鼠樹突狀細(xì)胞的分化、成熟和功能[A];中國生理學(xué)會第六屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2003年

3 郭大偉;梁健;姜曉峰;王學(xué)范;魏云濤;姜洪磊;;GPC3基因轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗肝癌HepG2細(xì)胞殺傷作用的研究[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

4 張新華;鐘翠平;顧云娣;顧曉;范強(qiáng);王國強(qiáng);周播江;;TGF-β1基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞增強(qiáng)移植心臟耐受性并降低Fractalkine的表達(dá)[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 于益芝;劉書遜;王文雅;張明徽;郭振紅;徐紅梅;齊潤姿;安華章;曹雪濤;;TRAIL在樹突狀細(xì)胞殺傷活化T細(xì)胞中的作用[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

6 尤長宣;羅榮城;張軍一;蘇瑾;廖旺軍;鄭航;Paul L Hermonat;;基因轉(zhuǎn)移制備樹突狀細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術(shù)大會論文集[C];2003年

7 葛長勇;李鴻鈞;孫茂盛;馮婷婷;靳昌忠;姚航平;吳南屏;;滅活SV40致敏的猴樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

8 葛長勇;李鴻鈞;謝天宏;張光明;易山;孫茂盛;吳南屏;;恒河猴樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

9 張堯;靳風(fēng)爍;蘭衛(wèi)華;李彥峰;張克勤;吳剛;葉錦;;聯(lián)合應(yīng)用塞萊西布和CpG-ODN對樹突狀細(xì)胞功能的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

10 夏強(qiáng);劉衛(wèi)彬;陳振光;張瑩;黃如訓(xùn);;胸腺成熟樹突狀細(xì)胞與重癥肌無力發(fā)生的相關(guān)性分析[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王雪飛;樹突狀細(xì)胞“面目”更清晰[N];健康報(bào);2004年

2 章靜波;干細(xì)胞研究新動向[N];健康報(bào);2009年

3 記者 白毅;間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)成熟樹突狀細(xì)胞增殖分化[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

4 方彤;樹突狀細(xì)胞瘤苗新進(jìn)展[N];健康報(bào);2006年

5 本報(bào)記者 沈湫莎;這一次,諾獎會不會頒給逝者[N];文匯報(bào);2011年

6 張獻(xiàn)懷;樹突狀細(xì)胞療法治療惡性黑色素瘤[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

7 記者　毛黎;美發(fā)現(xiàn)一種“超級”形態(tài)酶[N];科技日報(bào);2006年

8 楊淑娟;美研究出新型丙型肝炎疫苗[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

9 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 郭寧　施明;我國免疫學(xué)研究再攀新高峰[N];健康報(bào);2009年

10 ;慢性HBV感染使樹突狀細(xì)胞功能受損[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘建平;γ-干擾素對樹突狀細(xì)胞分化和功能成熟的調(diào)控及其基因修飾的樹突狀細(xì)胞抗腫瘤免疫機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2002年

2 朱偉國;PPAR-γ激動劑吡格列酮抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞免疫激活致動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的研究[D];浙江大學(xué);2010年

3 王正昕;腫瘤微環(huán)境中浸潤性樹突狀細(xì)胞的表型和免疫學(xué)功能的研究及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2000年

4 周向陽;新型熱休克蛋白HSP-DC激活樹突狀細(xì)胞及其佐劑效應(yīng)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 趙鴻;未成熟樹突狀細(xì)胞聯(lián)合骨髓移植誘導(dǎo)大鼠異體腎移植免疫耐受的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

6 陳玉丙;樹突狀細(xì)胞抗原負(fù)載及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大學(xué);2004年

7 王宏偉;肺間質(zhì)樹突狀細(xì)胞在多器官功能障礙綜合征中的免疫激活與免疫耐受作用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

8 趙毅;青藤堿對RA患者樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響及機(jī)制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 劉海波;Fas信號激活樹突狀細(xì)胞炎性復(fù)合體形成的生物學(xué)意義與分子機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 趙娟;受者來源的PIR-B轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞對小鼠異基因骨髓移植GVHD的保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉麗燕;MyD88在OK-432誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

2 楊永紅;D181調(diào)控TLR9信號影響DCs分泌CXCL-10的機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2013年

3 吳鳴宇;黑色素瘤基因（MAGE-1）相關(guān)肽負(fù)載樹突狀細(xì)胞對肝癌細(xì)胞殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2003年

4 孟冬梅;急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)及功能研究[D];青島大學(xué);2003年

5 梁軍利;IFN-β1a對多發(fā)性硬化樹突狀細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

6 黃祺琦;耐受性樹突狀細(xì)胞來源的exosome治療小鼠免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2010年

7 初曉霞;淋巴瘤樹突狀細(xì)胞的表達(dá)與臨床分期、惡性度及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2002年

8 郭佳;TLR配體誘導(dǎo)骨髓來源樹突狀細(xì)胞獲得產(chǎn)生全反式維甲酸的能力[D];浙江大學(xué);2011年

9 才志剛;凍融抗原沖擊致敏的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生肺癌特異性免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 董天庚;激動Toll樣受體的樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗對小鼠結(jié)腸癌殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：D181調(diào)控TLR9信號影響DCs分泌CXCL-10的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335361