發(fā)布時(shí)間：2021-08-17 05:31

　　乙肝病毒（HBV）慢性感染仍然危害著人類(lèi)的健康,全球大約有3.5億慢性乙型肝炎患者。長(zhǎng)期的HBV慢性感染可以導(dǎo)致脂肪肝和肝纖維化,最后發(fā)展為肝細(xì)胞肝癌。目前,HBV感染導(dǎo)致疾病的相關(guān)病理機(jī)制還需要進(jìn)一步研究,現(xiàn)有的抗病毒藥物并不能完全治愈HBV感染。代謝是生命活動(dòng)中生物化學(xué)過(guò)程的總稱(chēng),而病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制必然伴隨著代謝的變化。因此,宿主細(xì)胞對(duì)HBV復(fù)制的代謝應(yīng)答研究能夠從代謝水平提供病毒與宿主細(xì)胞之間的相互作用信息,為研究HBV致病機(jī)理和感染治療提供新的思路。本論文以含有HBV基因組的穩(wěn)定肝腫瘤細(xì)胞系為研究對(duì)象,以期建立和完善基于核磁共振（NMR）的細(xì)胞代謝組分析方法及具有統(tǒng)計(jì)意義的多變量代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析方法；采用代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)以及分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,研究HBV復(fù)制影響細(xì)胞代謝組的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)與HBV復(fù)制相關(guān)的代謝物以及所受影響的代謝途徑；闡明HBV復(fù)制導(dǎo)致的宿主細(xì)胞脂肪酸組成變化；深入探討HBV復(fù)制與宿主細(xì)胞代謝改變之間的關(guān)系。本論文建立了基于NMR的細(xì)胞代謝組分析所用樣品的制備方法；提出了細(xì)胞提取物樣品數(shù)據(jù)的細(xì)胞重量歸一化方法,并給出了具體的操作流程；完善了培養(yǎng)基提取物數(shù)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢物理與數(shù)學(xué)研究所)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：130 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 研究背景與內(nèi)容
    1.2 代謝組學(xué)簡(jiǎn)介
        1.2.1 代謝組學(xué)的定義
        1.2.2 代謝組學(xué)的研究方法與特點(diǎn)
    1.3 核磁共振簡(jiǎn)介
        1.3.1 核磁共振的基本原理
        1.3.2 化學(xué)位移
        1.3.3 J耦合常數(shù)
        1.3.4 代謝組學(xué)研究中常用的核磁譜
        1.3.5 核磁譜中物質(zhì)的歸屬
    1.4 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法
        1.4.1 數(shù)據(jù)的歸一化與標(biāo)準(zhǔn)化
        1.4.2 常用的多變量統(tǒng)計(jì)分析方法
        1.4.3 多變量統(tǒng)計(jì)分析模型的驗(yàn)證
        1.4.4 特征代謝物信息的提取
2 基于NMR的細(xì)胞樣品代謝組學(xué)分析方法的建立
    2.1 細(xì)胞樣品的制備方法
        2.1.1 材料與方法
        2.1.2 NMR樣品的配制和檢測(cè)
        2.1.3 結(jié)果與討論
    2.2 細(xì)胞樣品的數(shù)據(jù)歸一化方法
        2.2.1 細(xì)胞提取物數(shù)據(jù)的歸一化方法
        2.2.2 培養(yǎng)基提取物數(shù)據(jù)的歸一化方法
    2.3 小結(jié)
3 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 化學(xué)試劑
    3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.3 代謝組分析
        3.3.1 代謝物提取
        3.3.2 NMR樣品配制和檢測(cè)
        3.3.3 NMR譜圖數(shù)據(jù)分析
        3.3.4 脂肪酸組成分析
    3.4 蛋白質(zhì)組分析
        3.4.1 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞分離
        3.4.2 蛋白質(zhì)消化和多肽分離
        3.4.3 質(zhì)譜分析
        3.4.4 蛋白質(zhì)的鑒定和定量
    3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
    3.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.7 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
    3.8 HBV DNA復(fù)制水平檢測(cè)
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 代謝物的歸屬
    4.2 宿主細(xì)胞對(duì)HBV復(fù)制的整體代謝應(yīng)答
        4.2.1 HBV復(fù)制對(duì)細(xì)胞代謝輪廓的影響
        4.2.2 HBV復(fù)制對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)組的影響
    4.3 HBV復(fù)制對(duì)宿主細(xì)胞中心碳代謝的影響
    4.4 HBV復(fù)制與己糖胺生物合成途徑之間的關(guān)系
    4.5 HBV復(fù)制改變了宿主細(xì)胞的脂肪酸組成
    4.6 HBV復(fù)制與磷脂酰膽堿生物合成途徑之間的關(guān)系
    4.7 HBV復(fù)制改變宿主細(xì)胞的氨基酸代謝并誘導(dǎo)氧化應(yīng)激
5 討論
    5.1 宿主細(xì)胞的代謝改變與HBV復(fù)制和分泌之間的關(guān)系
    5.2 宿主細(xì)胞的代謝變化與腫瘤形成
    5.3 HBV誘導(dǎo)的代謝變化與脂肪肝和炎癥
    5.4 HBV誘導(dǎo)的代謝改變對(duì)治療的提示
    5.5 小結(jié)
6 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄A
附錄B
附錄C
附錄D
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]代謝組學(xué):一個(gè)迅速發(fā)展的新興學(xué)科（英文）[J]. 唐惠儒,王玉蘭.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2006(05)



本文編號(hào)：3347158