目的·研究新型受體相互作用蛋白激酶3（receptor interacting protein kinase 3,RIPK3）突變體的激酶活性。方法·分別對(duì)RIPK3中的4個(gè)氨基酸（Q84WDF87）進(jìn)行突變,并將這些突變體與混合譜系蛋白激酶樣假激酶（mixed lineage kinase domain like pseudokinase,MLKL）共同轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中。通過Western blotting檢測(cè)新型RIPK3突變體S232位點(diǎn)自磷酸化的情況及其對(duì)MLKL S345位點(diǎn)磷酸化的影響;通過免疫共沉淀法觀察RIPK3與MLKL之間的相互作用;采用非還原裂解法檢測(cè)MLKL的寡聚化情況。結(jié)果·RIPK3ΔQ84、RIPK3ΔW85和RIPK3ΔD86的激酶活性顯著降低,RIPK3Q84A/RIPK3Q84E、RIPK3W85Y和RIPK3D86A/RIPK3D86Y的激酶活性無(wú)明顯改變;RIPK3W85A的自磷酸化減少,但不影響MLKL的磷酸化與寡聚化。結(jié)論·Q84、W85與D86是調(diào)節(jié)RIPK3激酶活性的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn),RIPK3W85A的激酶活性減弱,但其對(duì)MLK... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019,39(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 質(zhì)粒
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.2.3 Western blotting
        1.2.4 免疫共沉淀
        1.2.5 蛋白多聚化檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 RIPK3Δ的激酶活性降低
    2.2 RIPK3(ΔQ84、ΔW85、ΔD86、ΔF87)激酶活性的變化
    2.3 RIPK3(Q84A、W85A、D86A、F87A)激酶活性的變化
    2.4 RIPK3(Q84E、W85Y、D86N、F87Y)的激酶活性無(wú)改變
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