目的：建立細菌表達譜分析技術平臺；初步將此技術應用于鼠疫耶爾森氏菌基因表達譜的研究，為鼠疫耶爾森氏菌功能基因組研究奠定基礎：（1） 磁捕獲雜交法提取和純化細菌mRNA方法的建立；（2） 基于DNA芯片的基因表達譜分析技術平臺的建立與評價；（3） 溫度調節(jié)鼠疫耶爾森氏菌基因表達譜分析的研究；（4） 實時定量RT-PCR對表達譜技術的評價。方法：利用磁珠捕獲雜交法從總RNA中除去rRNA，再用乙醇沉淀純化得到mRNA；從對各實驗條件的探索行細菌DNA芯片表達譜技術平臺的搭建與優(yōu)化，用實時定量：RT-PCR對此技術平臺進行評價；通過改變培養(yǎng)溫度模擬鼠疫耶爾森氏菌感染哺乳動物宿主時微環(huán)境的變化，研究其可能的致病相關基因。選取15條基因用實時定量RT-PCR對表達譜分析結果進行評價。結果：（1） 建立了磁珠捕獲雜交法提取和純化細菌mRNA的方法；（2） 搭建了基于DNA芯片的細菌表達譜技術平臺；（3） 發(fā)現(xiàn)401個不同溫度條件下差異表達的基因，鼠疫耶爾森氏菌的許多重要基因的表達發(fā)生了變化，如編碼毒力決定因子、調節(jié)元件、鐵代謝和能量代謝相關蛋白和前噬菌體的基因。另外，還發(fā)現(xiàn)了許多未知功能的基因簇。... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

鼠疫菌在自然界中的循環(huán)，以及鼠間鼠疫和人間鼠疫的形成〔‘“]

yersinia尸estisEV76總洲A電泳圖

號中可能還有部分rRNA沒有去除。A260nm/A280nm均在1.8一2.1之間，說明RNA純度較高。分別將1林g總RNA和實驗組的1林g富集后的RNA同時電泳，結果見圖4。從電泳結果看，1號和2號去除165rRNA和235rRNA較徹底，而3號和4號富集后的RNA仍見165rRNA和235rRNA條帶。這說明磁珠去除rRNA的能力已達到飽和，不能將所有的16SrRNA和235rRNA去除。在富集的樣品中，一些mRNA和小分子RNAs可見。所以，綜合mRNA定量和電泳結果，0.5mg磁珠加入1印g總RNA富集mRNA最佳。表6等量磁珠(0.5mg)加不同量的總RNA富集mRNA的結果實驗組別總RNA量扭g)富集mRNA量(林g)富集比率(%)戊60n韶A28onmQ了O聲51O150.89351.91443.440617.8919.147.098929.9335.491.92.02.4mRNA完整性鑒定結果富集mRNA的完整性通過變性膠電泳(圖4)和RT-PCR(圖5)進行驗證。結果表明，富集mRNA是完整的。圖5中NoRl’-Control陰性對照沒有條帶

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3332013