本文關(guān)鍵詞：抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙肝病毒是一種正鏈RNA病毒,它是導(dǎo)致人類(lèi)肝臟疾病的重要因素。在本文中,我們提出了一種新的抑制丙肝病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的方法,并構(gòu)建了核酸電化學(xué)傳感器進(jìn)行了驗(yàn)證。同時(shí),基于這一傳感器的設(shè)計(jì)思路,我們又研制了可以快速、靈敏地檢測(cè)NF-кB分子的傳感器,為NF-кB的分析提供了一種新途徑。 1、抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究 在本章中,我們提出了一種新的抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的方法。通過(guò)引入一段體外的RNA,使其和丙肝病毒的基因組二者與miR-122的堿基互補(bǔ)配對(duì)總數(shù)達(dá)到12個(gè),從而激活A(yù)go2蛋白的內(nèi)切酶活性,導(dǎo)致丙肝病毒基因組被切割,進(jìn)而從其與Ago2蛋白和miR-122所形成的復(fù)合物中釋放出來(lái)。由于失去了Ago2蛋白和miR-122的保護(hù)作用,釋放出來(lái)的丙肝病毒基因組很容易被降解,因而有效地抑制了其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。為驗(yàn)證Ago2蛋白被激活,以及丙肝病毒基因組被切割,我們構(gòu)建了一種電化學(xué)生物傳感器。該傳感器利用了S1核酸酶能夠水解DNA-RNA雜交鏈的單鏈部分這一特點(diǎn)進(jìn)行構(gòu)建。通過(guò)該傳感器我們發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)體系中引入這段體外的RNA,Ago2蛋白才能被激活。因此,該研究為抑制丙肝病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄提供了新的思路,對(duì)于丙肝的治療將具有重要意義。2、基于核酸外切酶構(gòu)建的核酸電化學(xué)傳感器用于NF-кB的檢測(cè) 基于前述傳感器的設(shè)計(jì)思路,我們對(duì)這一核酸電化學(xué)傳感器進(jìn)行了改進(jìn),以便用于NF-кB的快速檢測(cè)。首先,將G-四連體序列與NF-кB特異性識(shí)別序列相結(jié)合共同修飾在電極上,然后,采用另外一種核酸外切酶—λ核酸外切酶對(duì)DNA分子進(jìn)行切割從而產(chǎn)生G-四連體,最后,借助G-四連體結(jié)合血紅素(hemin)所形成的復(fù)合物產(chǎn)生的電化學(xué)信號(hào)實(shí)現(xiàn)了NF-кB快速、靈敏、簡(jiǎn)便的電化學(xué)分析。
【關(guān)鍵詞】：丙肝病毒 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄 Ago2蛋白 核酸電化學(xué)生物傳感器 S1核酸酶 NF-κB G-四連體 λ核酸外切酶 血紅素
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R373.21
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 緒論11-35
• 1 抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的研究背景11-16
• 1.1 丙肝病毒的結(jié)構(gòu)和基因組11-13
• 1.2 丙肝病毒的生命周期13-14
• 1.2.1 丙肝病毒的入侵13-14
• 1.2.2 丙肝病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯14
• 1.3 抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的研究進(jìn)展14-16
• 2 電化學(xué)分析技術(shù)簡(jiǎn)介16-24
• 2.1 電化學(xué)系統(tǒng)17-18
• 2.2 電化學(xué)方法18-22
• 2.2.1 循環(huán)伏安法19-20
• 2.2.2 差分脈沖伏安法20-21
• 2.2.3 交流阻抗法21-22
• 2.3 化學(xué)修飾電極22-24
• 3 電化學(xué)生物傳感器簡(jiǎn)介24-28
• 3.1 生物傳感器24-25
• 3.2 電化學(xué)生物傳感器25-26
• 3.3 核酸電化學(xué)生物傳感器26
• 3.4 適體生物傳感器26-28
• 4 本論文的主要研究?jī)?nèi)容28
• 5 參考文獻(xiàn)28-35
• 第一章 抑制丙肝病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究35-46
• 1.1 引言35
• 1.2 實(shí)驗(yàn)部分35-38
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑36
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器36-37
• 1.2.3 Ago2蛋白內(nèi)切酶活性的激活37
• 1.2.4 HCV的5'UTR在金電極表面的固定37-38
• 1.2.5 Ago2蛋白內(nèi)切酶活性的檢測(cè)38
• 1.2.6 電化學(xué)實(shí)驗(yàn)38
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論38-44
• 1.3.1 Additional RNA激活A(yù)go2蛋白的內(nèi)切酶活性38-39
• 1.3.2 電化學(xué)方法檢測(cè)切割后的HCV 5'UTR39-40
• 1.3.3 循環(huán)伏安法定性檢測(cè)切割后的HCV 5'UTR40-41
• 1.3.4 差分脈沖伏安法檢測(cè)切割后的HCV 5'UTR41-42
• 1.3.5 模擬切割作用以后HCV 5'UTR的電化學(xué)響應(yīng)42-44
• 1.4 討論44
• 1.5 參考文獻(xiàn)44-46
• 第二章 基于核酸外切酶構(gòu)建的核酸電化學(xué)傳感器用于NF-κB的檢測(cè)46-57
• 2.1 引言46-48
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分48-50
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑48-49
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器49
• 2.2.3 DNA分子在金電極表面的修飾49-50
• 2.2.4 NF-κB(p50)與DNA分子的結(jié)合以及λ外切酶的切割作用50
• 2.2.5 電化學(xué)實(shí)驗(yàn)50
• 2.3 結(jié)果與討論50-55
• 2.3.1 傳感器的原理50-51
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)各階段金電極表面的電化學(xué)表征51-52
• 2.3.3 循環(huán)伏安法定性檢測(cè)NF-κB52-53
• 2.3.4 差分脈沖伏安法檢測(cè)NF-κB53-54
• 2.3.5 不同濃度條件下NF-κB的檢測(cè)54-55
• 2.4 結(jié)論55
• 2.5 參考文獻(xiàn)55-57
• 附錄57-58
• 致謝58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 陸曉軍,鞠q

本文編號(hào)：332179