本文關(guān)鍵詞：Ⅱ型單純性皰疹病毒DNA疫苗的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：HSV-2是一種性傳播病毒，目前為止，世界范圍內(nèi)超過5億人感染。HSV-2是嗜神經(jīng)病毒，具有感染多樣性，終生潛伏于宿主感覺神經(jīng)元和腰骶背根神經(jīng)節(jié)，能引起生殖器皰疹和宮頸癌，并協(xié)助HIV-1病毒的傳播。目前主要應(yīng)用于臨床治療的阿昔洛韋等藥物雖能減輕HSV-2感染，但不能阻止疾病復(fù)發(fā)，預(yù)防病毒的傳播。因此，，研制安全、長期有效的HSV-2疫苗己成為預(yù)防病毒感染的關(guān)鍵。目前研究表明，體液免疫并不能徹底清除HSV-2，對于預(yù)防原發(fā)感染及限制復(fù)發(fā)感染，細(xì)胞免疫比體液免疫更為重要。HSV-2疫苗的未來發(fā)展也是以誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答為主，與體液免疫兩者平衡。 DNA疫苗的出現(xiàn)帶來了新的曙光，目前已經(jīng)廣泛用于人類病毒疫苗臨床實驗中，例如流感病毒、乙肝病毒和艾滋病病毒。動物實驗顯示接種HSV-2DNA疫苗可以誘導(dǎo)產(chǎn)生較為平衡的體液免疫和細(xì)胞免疫。本實驗選擇gD作為抗原，由于gD是HSV-2感染細(xì)胞的關(guān)鍵的糖蛋白之一，在病毒穿膜的環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要的作用，其本身具有較豐富的抗體表位和T細(xì)胞表位，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生相對較高的中和抗體和T細(xì)胞免疫應(yīng)答，是HSV-2疫苗研究的首選。同時，為能夠加強細(xì)胞免疫，本實驗選擇了另一種抗原UL25，研究表明UL25表位肽可以增殖活化HSV-2CD8+T細(xì)胞。將UL25與gD2基因融合，作為DNA疫苗，可誘導(dǎo)產(chǎn)生更強的細(xì)胞免疫和體液免疫。 由于DNA疫苗免疫原性較弱，所以本實驗選用IL-28B作為HSV-2DNA疫苗的佐劑，以期能有效的解決這一難題，從而抑制和清除HSV-2病毒感染。IL-28B屬于IFN-λs家族，同其它成員一樣，能阻止或限制病毒感染。Morrow等人使用IL-28作為HIV和流感H1N1DNA疫苗的佐劑，研究表明IL-28B在小動物模型能增強獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)答，促進(jìn)記憶細(xì)胞的增殖，增強CTL殺傷作用。 綜上所述，為了獲得更強的細(xì)胞免疫應(yīng)答與體液免疫，制備安全有效的HSV-2疫苗，本論文分別構(gòu)建了gD2和gD2UL25兩種DNA疫苗，以IL-28B作為佐劑，共免疫Balb/c小鼠，與FI-HSV-2和rAd-gD疫苗形式比較，研究DNA疫苗的免疫原性和清除HSV-2病毒的能力，評價其在致死劑量病毒攻擊Balb/c小鼠模型中的保護(hù)效果；同時，評價IL-28B能否作為HSV-2DNA疫苗的佐劑，增強免疫應(yīng)答，預(yù)防和抵抗HSV-2病毒的感染。實驗結(jié)果表明DNA疫苗能誘導(dǎo)產(chǎn)生HSV-2特異的體液免疫和細(xì)胞免疫，降低生殖道病毒載量，微弱的減輕攻毒小鼠發(fā)病程度，但免疫反應(yīng)較弱，保護(hù)能力有限，雖能抑制并清除HSV-2病毒，但是效果不佳。與IL-28B共免疫后，能夠明顯增強特異性IgG及IgG2a抗體的產(chǎn)生，增強與Th1相關(guān)聯(lián)的抗原特異性免疫應(yīng)答，較低水平地促進(jìn)中和抗體的產(chǎn)生，顯著性的增強IFN-γ的分泌，增強細(xì)胞免疫應(yīng)答，較為明顯的提高DNA疫苗清除生殖道HSV-2病毒的能力，顯著減輕小鼠的發(fā)病情況，縮短病程，使小鼠痊愈，表明IL-28B可以作為HSV-2DNA疫苗佐劑，增強其抵抗HSV-2病毒能力。同時，融合的多基因質(zhì)粒gD2UL25比gD2產(chǎn)生更強的體液免疫和細(xì)胞免疫，顯著的提高小鼠抵御致死劑量HSV-2病毒的能力。
【關(guān)鍵詞】：Ⅱ型單純性皰疹病毒 DNA疫苗 糖蛋白D UL25 白介素28B
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-32
• 1.1 Ⅱ型單純性皰疹病毒11-12
• 1.2 HSV-2 病毒結(jié)構(gòu)與功能12-14
• 1.3 HSV-2 的侵染過程14-15
• 1.4 HSV-2 發(fā)病機(jī)理與潛伏復(fù)發(fā)機(jī)制15-16
• 1.5 HSV-2 免疫作用機(jī)制16-18
• 1.5.1 HSV-2 與先天性免疫16-17
• 1.5.2 HSV-2 與獲得性免疫17-18
• 1.6 HSV-2 疫苗的研究現(xiàn)狀及其應(yīng)用前景18-22
• 1.6.1 滅活全病毒疫苗18-19
• 1.6.2 減毒活疫苗19
• 1.6.3 復(fù)制缺損型疫苗19-20
• 1.6.4 亞單位疫苗20-21
• 1.6.5 病毒載體疫苗21-22
• 1.7 HSV-2 DNA 疫苗的應(yīng)用22-26
• 1.7.1 DNA 疫苗的起源及作用機(jī)理22-24
• 1.7.2 HSV-2 DNA 疫苗的研究現(xiàn)狀及展望24-26
• 1.8 Ⅲ型干擾素26-29
• 1.8.1 干擾素簡介26
• 1.8.2 Ⅲ型干擾素簡介26-27
• 1.8.3 Ⅲ型干擾素的臨床應(yīng)用27-28
• 1.8.4 IL-28B 佐劑研究現(xiàn)狀及前景28-29
• 1.9 論文的立題依據(jù)及設(shè)計29-32
• 1.9.1 立題依據(jù)與創(chuàng)新點29-30
• 1.9.2 實驗思路與設(shè)計30-32
• 第二章 實驗材料與方法32-46
• 2.1 實驗材料32-36
• 2.1.1 菌株、細(xì)胞、質(zhì)粒、病毒和動物32
• 2.1.2 引物和短肽32-33
• 2.1.3 主要試劑及緩沖液33-34
• 2.1.4 試劑配制34-36
• 2.2 實驗儀器36-37
• 2.3 實驗方法37-46
• 2.3.1 gD2UL25 基因序列的合成37
• 2.3.2 gD2 及 gD2UL25 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定37-38
• 2.3.3 gD2 及 gD2UL25 真核蛋白表達(dá)的鑒定38-39
• 2.3.4 IL-28B 基因序列的合成39
• 2.3.5 IL-28B 質(zhì)粒的構(gòu)建39
• 2.3.6 IL-28B-HA 真核蛋白表達(dá)的鑒定及定量39-41
• 2.3.7 重組質(zhì)粒 gD2、gD2UL25 及 IL-28B 的擴(kuò)增41
• 2.3.8 免疫41-42
• 2.3.9 免疫原性評價42-44
• 2.3.10 攻毒后保護(hù)力評價44-46
• 第三章 實驗結(jié)果與討論46-61
• 3.1 gD2 及 gD2UL25 重組質(zhì)粒的構(gòu)建46
• 3.2 gD2 及 gD2UL25 真核蛋白表達(dá)的鑒定46-47
• 3.3 IL-28B 質(zhì)粒的構(gòu)建47-48
• 3.4 IL-28B-HA 真核蛋白表達(dá)的鑒定及 ELISA 定量48-49
• 3.4.1 IL-28B-HA 真核蛋白表達(dá)的鑒定48
• 3.4.2 IL-28B-HA 真核蛋白表達(dá) ELISA 定量48-49
• 3.5 免疫效果評價49-58
• 3.5.1 免疫原性評價49-55
• 3.5.2 攻毒后保護(hù)力評價55-58
• 3.6 分析與討論58-61
• 全文結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 作者簡介71-72
• 致謝72

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：331826