第一部分:人APOBEC3G基因的克隆與真核表達(dá)目的建立宿主固有抗HIV-1因子載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣蛋白3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme,catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G,hA3G）的真核表達(dá)體系。方法采用反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)從HIV-1感染者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中獲取hA3G基因編碼區(qū),將其連接入T載體,測(cè)序驗(yàn)證后再克隆至真核表達(dá)載體pEGFP-N1中,然后將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-A3G轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,分別用RT-PCR法和蛋白印跡法（Western Blot）驗(yàn)證融合蛋白hA3G-EGFP在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果克隆獲得hA3G基因編碼區(qū)長(zhǎng)1 154 bp,測(cè)序結(jié)果與GenBank中hA3G參考序列（NM021822）比對(duì)發(fā)現(xiàn)存在兩處差異,分別位于mRNA第588位和746位堿基處。重組質(zhì)粒pEGFP-N1-A3G轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,在熒光顯微鏡下觀察到了綠色熒光,并分別用RT-PCR法和Western Blot法驗(yàn)證了目的基... 

【文章來(lái)源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 人APOBEC3G基因的克隆與真核表達(dá)
    試劑與材料
    主要儀器
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 HIV-1感染者PBMC中APOBEC3G/B/F基因表達(dá)水平及其與CD4~+T細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)性研究
    試劑與材料
    主要儀器
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
小結(jié)
討論
參考文獻(xiàn)
綜述
英文縮略詞表
碩士期間發(fā)表論文和參編書(shū)籍
致謝



本文編號(hào)：3306731