研究背景:MicroRNA （miRNAs）是一類內(nèi)源性長(zhǎng)約19-23個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA,通常在轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平調(diào)控基因的表達(dá)。PGC-1α在肝臟中的主要作用是促進(jìn)肝糖異生及調(diào)節(jié)脂肪酸氧化。本文主要通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究了miR-696對(duì)PGC-1α調(diào)控的分子機(jī)制及其在肝臟糖異生中的作用。研究方法：（1）采用western blotting和qRT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)ob/ob小鼠和C57BL/6小鼠肝臟組織中PGC-1α蛋白及miR-696的表達(dá)水平；（2）構(gòu)建pre-miR-696-LV, pre-NC-LV, anti-miR-696-LV, anti-NC-LV慢病毒載體,分別感染小鼠原代肝細(xì)胞72h后,在熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的感染情況,同時(shí)qRT-PCR和western blotting分別檢測(cè)各組小鼠原代肝細(xì)胞中miR-696及PGC-1α蛋白的表達(dá)水平；（3）構(gòu)建psiCHECK-2-PGC-1α3’UTR質(zhì)粒,通過luciferase檢測(cè)研究aiR-696對(duì)PGC-1α是否有直接的靶向作用；（4）選擇肝臟糖異生關(guān)鍵酶PEPCK為指標(biāo),進(jìn)一步研究miR-69... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

}MiCFO的作用機(jī)制

活MAPK的激酶(MEK)。MEK再進(jìn)一步通過MAPK激活核糖體S6激酶，兩者共同作用進(jìn)一步激活下游轉(zhuǎn)錄因子，如圖1.4所示。胰島素主要通過上述兩種信號(hào)傳導(dǎo)途徑的一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，發(fā)揮著強(qiáng)大的生物學(xué)效應(yīng)。I Im i I §2?飛 &L ,Z <-EaX->1' )r ^ ； 丁k?9(供:j? aifl ttSd?. MW衣 Avw fjfi ffy- Cii,l ?仁圖1.4胰島素信號(hào)傳導(dǎo)示意圖2.3.3 IR的分子水平機(jī)制IR的發(fā)生機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，主要與胰島素受體前、受體及受體后的異常有關(guān)。由于胰島素需要與受體結(jié)合后才能通過一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，因此受體的數(shù)量、胰島素與受體的親和性，特別是受體酪氨酸激酶的活性狀態(tài)都相當(dāng)重要[25]。目前研究認(rèn)為，編碼受體的基因突變引起的信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，尤其是受體自動(dòng)磷酸化功能的障礙是IR的主要分子水平機(jī)制[26]。(1)胰島素受體前缺陷胰島素受體前缺陷主要包括：胰島素抗體形成（多為注射動(dòng)物胰島素所致)；胰島素基因突變引起胰島素分子結(jié)構(gòu)異常；胰島素降解加速；胰島素措抗激素的作用致胰島素抵抗等。內(nèi)源性或外源性途徑產(chǎn)生的胰島素抗體，可干擾胰島素與其受體的正常結(jié)合從而造成胰島素抵抗。例如，注射動(dòng)物源胰島素所產(chǎn)生的胰島素抗體可能導(dǎo)致患者發(fā)生胰島素抵抗等癥狀I(lǐng)27]。胰島素的基因突變可能產(chǎn)生分子結(jié)構(gòu)異常的胰島素

pHBLV-CMVIE-IRES-ZsGreen 圖譜如圖 2.1 所示，其中 EcoRI 和 BamHI 為插入位點(diǎn)。然后用包裝好的慢病毒感染小鼠原代肝細(xì)胞。具體步驟為：將小鼠原代肝細(xì)胞鋪盤于6孔板，每孔板約5X105個(gè)細(xì)胞，觀察細(xì)胞密度達(dá)30%滿后在各組細(xì)胞中分別加入不同的慢病毒載體，M01=40，24小時(shí)后換液。72小時(shí)后在突光顯微鏡下觀察小鼠原代肝細(xì)胞中ZsGreen綠色突光蛋白的表達(dá)情況即反映慢病毒的感染情況。


本文編號(hào)：3304948