本文關(guān)鍵詞：抗燒燙傷感染多器官衰竭綠膿桿菌毒素疫苗的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在燒傷患者中綠膿桿菌的檢出率高居各種感染菌首位,綠膿桿菌所產(chǎn)生的致死性毒素綠膿桿菌外毒素A(PEA)是引起患者死亡的主要原因。現(xiàn)有的針對(duì)PEA的治療方法主要分為主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫兩種形式,但應(yīng)用異源動(dòng)物血清治療,可能造成嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng),加之綠膿桿菌具有天然耐藥性以及廣譜抗生素的泛濫使用,使得多重耐藥綠膿桿菌感染的情況日益嚴(yán)重。 PEA毒素具有受體結(jié)合區(qū)、越膜區(qū)和毒性區(qū),毒素由受體結(jié)合區(qū)與細(xì)胞表面廣泛存在的受體結(jié)合,通過(guò)越膜區(qū)將毒性區(qū)轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮ADP核糖基化酶作用,使EF-2發(fā)生ADP核糖基化,失活EF-2,阻止細(xì)胞蛋白質(zhì)合成,造成細(xì)胞死亡和組織、器官衰竭。所以抑制毒素與受體結(jié)合是保護(hù)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)。 熱休克蛋白(HSP)是一種高度保守且具有分子伴侶功能的應(yīng)激性蛋白,同時(shí)具有增強(qiáng)免疫的生物學(xué)特性：通過(guò)模式識(shí)別受體激活效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。 因此本研究利用基因工程手段將PEA中序列高度保守、免疫原性突出的受體結(jié)合亞基與結(jié)核桿菌HSP65融合表達(dá),經(jīng)發(fā)酵罐高密度發(fā)酵并層析純化獲得融合蛋白HSP65-PEA,作為免疫原對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫,經(jīng)小鼠攻毒保護(hù)性實(shí)驗(yàn),進(jìn)行免疫效果評(píng)估。同時(shí)建立多克隆和單克隆ELISA抗體檢測(cè)方法及鼠、兔抗體水平的ELISA檢測(cè)方法。 結(jié)果證明重組蛋白HSP65-PEA在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),純化獲得純度為95%以上的重組蛋白,用其免疫后小鼠能夠產(chǎn)生足量滴度的保護(hù)性抗體,保護(hù)動(dòng)物耐受PEA毒素攻擊,在機(jī)體中可以產(chǎn)生對(duì)抗PEA毒素的能力,以5、10倍LD50致死劑量的天然精致PEA毒素攻擊小鼠,同時(shí)ELISA檢測(cè)抗體滴度,結(jié)果顯示無(wú)佐劑組產(chǎn)生抗體滴度高于弗氏佐劑組和鋁鹽佐劑組,其攻毒保護(hù)率達(dá)到70-100%,證明該融合蛋白HSP65-PEA作為免疫原產(chǎn)生的抗體具備了保護(hù)PEA毒素攻擊的能力,充分達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目的。 綜上所述,構(gòu)建獲得的高效融合表達(dá)蛋白HSP65-PEA具有很強(qiáng)的免疫原性,能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度的中和抗體,在體內(nèi)中和感染的PEA毒素,防止毒素的侵襲和細(xì)胞毒性作用,同時(shí)證明結(jié)核桿菌HSP65可以作為自體佐劑,發(fā)揮抗原提呈和加強(qiáng)作用,抗體水平優(yōu)于外來(lái)佐劑,避免了外來(lái)佐劑的不良反應(yīng),大大提高了蛋白的安全性。
【關(guān)鍵詞】：PEA HSP65 純化 攻毒保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R644;R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 前言9-11
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述11-21
• 第一章 綠膿桿菌的研究概況11-18
• 1.1 綠膿桿菌簡(jiǎn)介11
• 1.2 綠膿桿菌對(duì)人和畜禽的致病性11-12
• 1.3 綠膿桿菌外毒素A(PEA)及其分子結(jié)構(gòu)12-14
• 1.4 綠膿桿菌外毒素A的作用機(jī)理14-16
• 1.5 綠膿桿菌外毒素A的應(yīng)用16-18
• 第二章 熱休克蛋白的研究概況18-21
• 2.1 熱休克蛋白(HSP)簡(jiǎn)介18-19
• 2.2 HSP的生物學(xué)功能19-21
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容21-47
• 第一章 HSP65-PEAⅠ基因構(gòu)建及表達(dá)21-30
• 1.1 材料與方法21-26
• 1.2 結(jié)果26-29
• 1.3 討論29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 第二章 工程菌PEAⅠ、HSP65-PEAⅠ發(fā)酵及融合蛋白純化30-36
• 1.1 材料與方法30-33
• 1.2 結(jié)果33-34
• 1.3 討論34-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 第三章 抗PEAⅠ單克隆抗體、多克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)品制備36-42
• 1.1 材料方法36-38
• 1.2 結(jié)果38-40
• 1.3 討論40-41
• 1.4 小結(jié)41-42
• 第四章 小鼠經(jīng)HSP65-PEAⅠ免疫后攻毒保護(hù)性試驗(yàn)42-47
• 1.1 材料和方法42-43
• 1.2 結(jié)果43-45
• 1.3 討論45
• 1.4 小結(jié)45-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 附錄A53-58
• 附錄B58-59
• 作者簡(jiǎn)介59-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：抗燒燙傷感染多器官衰竭綠膿桿菌毒素疫苗的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：330137